换一批
换一批摘要目的 探究吴茱萸碱(Evodi amine,EVO)对脂多糖(LPS)诱导巨噬细胞活化的抑制作用及其相关分子机制.方法 实验分为正常对照组,溶媒组(终浓度为5％的DMSO),EVO单独处理组(50uM),LPS模型组(10ug/ml),EVO (50uM) +LPS (10ug/ml)组,EVO (20uM) +LPS (10ug/ml)组.LPS作用12h后,收集细胞团块及细胞培养上清.通过酶联免疫吸附法(ELISA)及实时荧光定量PCR (RT-PCR)分别检测细胞培养上清中炎症因子IL-1,IL-6和TNF-α的蛋白及mRNA表达水平.为了进一步探讨EVO分子作用机制,收集LPS作用2h后的细胞团块,利用Western blot检测细胞中NF-κB相关信号通路分子的蛋白表达水平,并采用凝胶迁移实验(EMSA)检测细胞核中NF-κB的DNA结合活性.结果 与LPS单独处理组相比,EVO能显著降低LPS作用下巨噬细胞中IL-6,IL-1 β,TNF-α的mRNA及蛋白水平.EMSA结果显示EVO可抑制LPS诱导的NF-κB的DNA结合活性,同时Western blot结果表明EVO对IκBa蛋白的降解以及IκBα磷酸化水平均具有抑制作用.结论 吴茱萸碱对脂多糖(LPS)诱导的巨噬细胞活化具有显著的抑制效应,并且该作用可能通过下调IκBα磷酸化水平,阻止IκBa蛋白的降解,进而抑制NF-κB的DNA结合活性来实现.
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