换一批
换一批摘要背景与目的:已知细胞分裂周期抑制因子P21通过蛋白酶体通路降解,其氨基端的泛素化可能参与了这一过程.Flag为一蛋白标签,常用于标记重组蛋白质,以便对靶蛋白进行生物学功能分析.本文旨在研究N-端加flag对P21蛋白质稳定性的影响.材料与方法:建立稳定表达外源flag-p21蛋白质的NIH3T3细胞株,应用蛋白印迹法(WB)检测NIH3T3细胞表达的flag-p21,并比较其与内源P21蛋白质半衰期的差异;确定阻断蛋白酶体水解通路对其降解过程的影响.结果:NIH3T3细胞表达的内源P21蛋白质半衰期约30 min,而同一细胞表达的flag-p21融合蛋白半衰期则明显延长;用抑制剂MG-132阻断蛋白酶体水解通路后,P21蛋白质的量明显增加,但同一细胞内表达的flag-p21量却无明显改变.结论:N-端加flag标签可增加P21蛋白质的稳定性.在对P21蛋白质的生物学功能进行研究时,应考虑N-端加flag对P21泛素化-蛋白酶体依赖的降解过程的影响.
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