换一批基于三色流式细胞术的小鼠外周血微核试验方法的建立
Three-color labeling method for flow cytometric measurement of micronucleus in mouse peripheral blood
摘要目的:为克服传统显微镜检微核(micronucleus,MN)方法耗时、费力、主观等缺点,建立基于CD71、CD61荧光抗体和碘化丙啶(cyclophosphamidr,PI)的三色流式细胞术(flow cytometry,FCM)研究小鼠外周血微核的自动化检测方法.方法:经口单次给予小鼠0、20、40和80 mg/kg环磷酰胺(CP),于不同时间点收集外周血;另一批小鼠给予CP 40 mg(kg·d)经口灌胃,连续染毒5d,分别于给药前和每次给药后24 h收集外周血.采用-80℃甲醇固定血细胞,CD71、CD61荧光抗体、RNA酶和PI孵育血细胞,以疟原虫感染的红细胞作为生物标准物调校FCM后,对CP诱导的小鼠外周血中含MN的CD71<'+>网织红细胞(reticulocytes,RET)进行检测.结果:单次染毒后48 h MN-RET达峰值,且MN-RET呈现明显的剂量依赖性增加(r=0.984 9,P<0.01);重复染毒5 d,FCM监测的HN-RET染毒2 d后达到稳态水平.FCM检测的MN-RET峰值和稳态水平与常规显微镜观察的骨髓微核率有良好的相关性(r=0.9212,P<0.01).结论:FCM小鼠外周血微核法稳定可靠,可以作为常规显微镜小鼠骨髓阅片法的替代方法,用于小鼠体内微核试验.
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分类号
R99（毒物学《毒理学》）
栏目名称
DOI
10.3969/j.issn.1004-616x.2011.02.011
发布时间
2011-07-01（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）
基金项目
上海科委专业技术服务能力建设基金资助项目（09DZ2290900）
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