换一批HeLa细胞中Zwint-1选择剪接亚型v7的表达鉴定
Identification of the alternatively spliced variant v7 of Zwint-1 in HeLacells
摘要目的：验证在HeLa细胞系中是否存在Zwint-1 v7选择性剪切亚型的mRNA和蛋白产物。方法：在缺失片段两侧设计引物，利用PCR和克隆测序验证HeLa细胞中是否存在缺失片段的mRNA；构建Zwint-1 v73′端特异区段(Z7)的GST融合表达载体pGEX-KG-GST-Z7，转化入BL21菌种诱导表达，菌体经超声破碎和2 mol/L尿素洗涤纯化，融合蛋白经SDS-PAGE电泳并切胶回收后作为抗原与佐剂混合乳化并免疫C57BL/6小鼠，收获多克隆抗血清Anti-Z7，采用Dot blot检测多克隆抗体的效价，Western blot检测HeLa细胞全蛋白中的Z7蛋白产物。结果：PCR和测序结果表明存在缺失37 bp的核酸片段；SDS-PAGE电泳显示在30.7 kDa处出现明显的蛋白条带；Dot blot结果表明1∶5000稀释的多克隆抗体能检出12 ng GST-Z7；Western blot结果表明，1∶200稀释的多克隆抗体可识别HeLa细胞中Zwint-1 v7蛋白。结论：本研究在核酸水平和蛋白水平初步验证了HeLa细胞中存在Zwint-1v7。
更多相关知识
关键词
HeLa细胞Zwint-1v7蛋白原核表达多克隆抗体制备HeLa cellsZwint-1 v7 proteinprokaryotic expressionantibody production
栏目名称
DOI
10.3969/j.issn.1004-616x.2014.02.008
发布时间
2014-05-24（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）
基金项目
国家自然科学基金（31300761）
- 浏览528
- 被引1
- 下载30
相似文献
- 中文期刊
- 外文期刊
- 学位论文
- 会议论文
