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预扩增qPCR方法检测少量小鼠早期胚胎细胞中DNA甲基化相关基因的表达

Detection of expression of methylation-related genes in mouse early embryonic cells using pre-amplification-based real time quantitative PCR

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摘要目的:比较3种实时定量PCR(qPCR)方法对少量小鼠早期胚胎细胞中甲基化相关基因表达水平的检测效果,以期获得适合日常检测的方法.方法:分别应用常规qPCR方法、基于等温预扩增的qPCR方法、基于PCR预扩增的qPCR方法3种方案对少量小鼠早期胚胎细胞样本中甲基化相关基因TET1、TET2、TET3、DNMT3A的mRNA表达进行检测.结果:3种方法的灵敏度由高到低依次为基于等温预扩增的qPCR方法、基于PCR预扩增qPCR方法、常规qPCR方法.前两种方法均能在合适的循环数下对少量小鼠胚胎细胞中的多个甲基化相关基因表达进行定量.而基于PCR预扩增的qPCR方法比基于等温预扩增的qPCR方法更经济,适合日常检测.因此,我们选择应用基于PCR预扩增的qPCR方法,检测了小鼠卵细胞以及卵细胞受精后22 h甲基化相关基因表达的变化,结果发现该过程中TET1表达量很低,不易检测到;TET2表达呈降低趋势;TET3和DNMT3A表达显著升高(P＜0.01),与文献报道基本一致.结论:基于等温预扩增的qPCR方法检测少量细胞样品中甲基化相关基因的表达的灵敏度在3种qPCR方法中最高.而基于PCR预扩增的qPCR方法操作简单、灵敏度较高、成本相对低,适合少量细胞样本中多个相关基因表达的实时定量日常检测.

作者程琳 ^[1] 孙平楠 ^[2] 谢庆东 ^[3] 周小玲 ^[1] 学术成果认领

作者单位 汕头大学医学院干细胞P2实验室,广东汕头515041;汕头大学医学院生殖医学中心,广东汕头515041;广东省感染病与分子免疫病理重点实验室,广东汕头515041 ^[1] 汕头大学医学院干细胞P2实验室,广东汕头515041;广东省感染病与分子免疫病理重点实验室,广东汕头515041 ^[2] 汕头大学医学院干细胞P2实验室,广东汕头515041;汕头大学医学院生殖医学中心,广东汕头515041 ^[3]

关键词预扩增实时定量PCR 小鼠早期胚胎细胞甲基化相关基因 pre-amplification real time quantitative PCR mouse early embryonic cell methylation-related genes

医学主题词方法(Methods)细胞(Cells)甲基化(Methylation)小鼠(Mice)胚胎结构(Embryonic Structures)

分类号 Q781（分子生物学基因工程《遗传工程》）

栏目名称

论著

DOI 10.3969/j.issn.1004-616x.2016.01.011

发布时间 2016-05-11（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

基金项目

国家自然科学基金（81570567）国家自然科学基金（81571994）广东省自然科学基金（2014A030313483）广东省自然科学基金（2015A030313447） :教育部留学回国人员科研启动基金 :汕头大学医学院李嘉诚基金