摘要目的:评估运动训练对尿源干细胞(USCs)原代产量及早期生物学特性的影响,并考察晚间固定时段采样的可行性,为无创、标准化获取USCs提供实验依据.方法:通过设计自身对照,即同一志愿者于晨醒后(6:00-7:00)、上午(9:00-10:00)、下午(14:00-15:00)、晚间(20:00-21:00)4个时点留尿,通过比较原代克隆形成数以确定最佳采样时段;在最佳采样时段内,先静息7 d,再连续7 d进行固定强度跑步(2.8 km,16～18 min),运动后即刻留尿.两组尿液按统一流程分离培养USCs.通过形态学观察评估运动训练对USCs细胞形态的影响,采用四甲基噻唑蓝(MTT)法检测USCs生长活力并绘制7 d生长曲线,采用逆转录实时荧光定量 PCR(RT-qPCR)法检测 USCs 干性基因 OCT4、C-MYC、SOX2、NANOG mRNA 的表达水平,Western blot 法检测 O CT4、C-MYC蛋白的表达.结果:与其余时段相比,晚间(20:00-21:00)采样可稳定获得USCs克隆,克隆形成率更高.在晚间时段内,与静息对照组相比,运动组的USCs细胞形态更为均一,胞质更透亮,细胞间连接更紧密;细胞活力增殖曲线第7天D(570)显著升高(P＜0.01),表现出更持久的增殖活力;干性基因OCT4、C-MYC mRNA的表达水平上调(P＜0.05或P＜0.01),SOX2、NANOG mRNA表达水平无显著差异(P＞0.05);OCT4、C-MYC的蛋白表达水平上调(P＜0.01).结论:晚间(20:00-21:00)取材联合运动训练可显著提升USCs提取效率并优化其早期生物学特性,为后续的规模化扩增与临床转化提供了简单、可行的干预策略.