换一批Spike蛋白介导细胞融合程度定量方法的建立及其在药物筛选中的应用
Establishment of quantitative method of Spike protein mediated cell fusion degree and its application in drug screening
摘要新型冠状病毒Spike蛋白(S蛋白)与受体ACE2结合介导细胞融合的发生,为进一步探究新冠感染合胞体发生、发展的规律及致病机制,明确关键蛋白靶点,筛选干预合胞体形成的药物,笔者拟构建新冠S蛋白介导的细胞融合程度的定量方法.利用pCDH-CMV-MCS-EF1-Puro、pLV-CMV-MCS-3FLAG-IRES-Bla、S蛋白基因序列、ACE2基因序列、LacZ基因序列、EcoRⅠ限制性内切酶及同源重组酶构建慢病毒穿梭质粒pCDH-S,pCDH-ACE2,pLV-α与pLV-ω,利用该慢病毒质粒分别构建稳定表达S蛋白与ACE2蛋白的293 FT和A549细胞系,随后利用pLV-α与pLV-ω慢病毒质粒分别感染上述稳定细胞系,构建出可以定量细胞融合程度的细胞系293FT-S1-56,A549-S1-56,293FT-ACE2△11-41,A549-ACE2△11-41.最后采用Western Blot蛋白免疫印迹技术鉴定上述融合定量细胞系中S蛋白与ACE2蛋白的过表达效果,并通过细胞共培养确定融合效果,用β-半乳糖苷酶报告基因检测试剂盒定量细胞融合程度.结果显示,慢病毒载体和稳定细胞系构建成功,时间梯度、转染梯度实验显示该系统具有良好的定量灵敏度,并能用于卡莫司他(Camostat mesylate)和氯硝柳胺(Niclosamide)等药物抗融合效果的定量评价.成功构建的新冠病毒Spike蛋白介导细胞融合程度定量系统,可用于不同S蛋白突变体致融合能力评价和抗融合药物筛选评价,可为进一步的研究奠定技术基础.
更多相关知识
关键词
新型冠状病毒Spike蛋白ACE2受体细胞融合定量慢病毒SARS-CoV-2Spike proteinACE2 receptorcell fusion quantificationlentivirus
分类号
R392-3（医学免疫学）
栏目名称
DOI
10.3969/j.issn.1000-2162.2024.05.013
发布时间
2024-11-05（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）
基金项目
国家自然科学基金（32370178）
- 浏览4
- 被引1
- 下载0
相似文献
- 中文期刊
- 外文期刊
- 学位论文
- 会议论文
