换一批石鲽基因组DNA的提取及其RAPD体系的优化
DNA Extraction from Kareius bicoloratus Genome and Its Optimization of RAPD Reaction System
摘要[目的]研究石鲽基因组DNA的提取及其RAPD体系的建立和优化.[方法]以石鲽为试材,按常规酚/氯仿抽提法提取其基因组的DNA,对影响RAPD反应的各因素进行优化,建立了石鲽的最佳RAPD反应体系和程序.[结果]采用常规酚/氯仿抽提法获得的DNA完全能够满足RAPD分析的要求.通过优化建立一套适合石鲽的稳定的RAPD反应体系:反应体系总体积为25 μl,包括10×buffer 2.5 μl,MgCl 2 2 mmol/L,dNTPs 0.15 mmol/L,引物 0.2 μmol/L,模板 30 ng,Taq 酶 1 U.扩增程序为:94 ℃预变性5 min,45次PCR循环(94 ℃变性45 s,36 ℃退火45 s,72 ℃延伸2 min 和72 ℃延伸10 min.利用该体系对OPK和OPV系列共40条引物进行扩增,发现其中部分引物能产生稳定、清晰的条带.[结论]该体系为石鲽遗传多样性以及相关分子标记的研究奠定了基础.
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