换一批
换一批摘要[目的]研究犬IL-2基因的克隆和表达,为开发新型免疫增强荆和基因工程疫苗提供理论支持.[方法]从犬全血中分离出白细胞,经刀豆素刺激培养20 h后,提取总RNA;根据GenBank 中犬IL-2基因序列,设计1对引物,进行PCR扩增,并构建原核表达载体pET-28a,将其转化到宿主菌B121中,经IPTG 诱导表达.表达产物用SDS-PAGE进行分析.[结果]RT-PCR 扩增出一条约500 bp的条带,与预期结果相符;重组质粒pMD18-T-IL2 经双酶切后,产生一个约500 bp基因片段,说明目的基因被成功克隆;表达载体pET-28a-IL2 经双酶切和PCR鉴定后,分别产生一个约500 bp目的片段,表明表达载体构建成功;表达产物经SDS-PAGE 分析,分子量约为20 kDa,与预期蛋白大小基本相同.[结论]IL-2基因被成功克隆和表达.
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