换一批
换一批细菌性条斑病菌JH01诱导水稻抗病均一化差减文库的构建
Construction of a Normalized Subtractive cDNA Library of Rice Inoculated with Xanthomonas oryzae pv.oryzacola JH01
摘要[目的]构建细菌性条斑病菌诱导下的水稻抗病均一化差减cDNA文库,对获得的差异表达ESTs进行生物信息学及抗病相关基因的表达分析.[方法]以水稻IR26 (Tester)和两优培九(Driver)幼苗5～6叶期叶片为材料,采用双链特异性核酸酶(DSN)介导的均一化消减杂交技术,构建细菌性条斑病菌JH01诱导的水稻抗病相关基因差减cDNA文库,以pLB-F和pLB-R为引物,通过菌液PER扩增对差减文库的质量进行检测.[结果] cDNA文库的插入片段分布在0.5～2.0 kb,平均大小约为1.0 kb,重组率达95％.序列测定分析发现,随机挑取的504个克隆中有98条差异表达基因;经BLAST比对和GO注释发现,59条序列具有同源基因,分别参与信号转导、能量代谢、过敏性坏死反应、防卫反应等;另外39条序列无相似基因,有待进一步研究.通过实时荧光定量PCR发现,从该文库中分离得到的OsNDPK4参与细菌性条斑病菌JH01诱导的水稻防卫反应.[结论]水稻受细菌性条斑病菌侵染的cDNA文库质量较好,为研究条斑病菌致病性因子与水稻互作机制奠定基础.
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关键词
细菌性条斑病水稻双链特异性核酸酶(DSN)均一化差减杂交荧光定量PCRBacterial leaf streakRiceDuplex-specific nuclease (DSN)Normalized subtractive hybridizationReal-tine fluorescence quantitative PCR
分类号
S432.1
栏目名称
DOI
10.3969/j.issn.0517-6611.2016.02.065
发布时间
2017-04-11
基金项目
浙江省自然科学基金项目（Y3110194）
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