换一批
换一批过表达KAR2基因对毕赤酵母产米黑根毛霉脂肪酶的影响
Effect of Overexpression of KAR2 on Rhizomucor miehei Lipase Expression in Pichia pastoris
摘要Kar2p是分子伴侣蛋白,可与新生肽结合,促进新生肽进入内质网.为研究其对米黑根毛霉脂肪酶(RML)在毕赤酵母中表达的影响,通过PCR方法从毕赤酵母菌株中克隆到KAR2基因,并用毕赤酵母胞内表达载体pPIC3.5K构建过表达质粒KAR2-pPIC3.5K.用电转化的方法,将KAR2-pPIC3.5K二次转化到含4-拷贝rml基因的毕赤酵母重组菌株4pRML-X33中,获得能同时过表达RML和KAR2p的二次转化子4pRML-X33-KAR2.摇瓶发酵发现,过表达KAR2基因对菌株生长无明显影响,但RML胞外酶活降低.采用RT-qPCR方法分析菌中rml及UPR相关基因的转录水平,发现KAR2基因转录水平上调了3.7倍,虽然仅引起与UPR相关的HAC1基因转录水平的下调,但却使rml的表达下调43％.说明KAR2过表达导致RML产量降低是降低了rml的mRNA量,而不是增加内质网中蛋白折叠的压力.
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