换一批铜绿假单胞菌外膜蛋白Ⅰ载体疫苗构建及免疫效果研究
Construction of Pseudomonas aeruginosa Outer Membrane Protein Ⅰ Recombinant Vector Vaccine and Its Immune Efficacy Study
摘要[目的]构建表达铜绿假单胞菌外膜蛋白I的重组乳酸乳球菌载体疫苗,评价构建的载体疫苗免疫效果,为研发可防治铜绿假单胞菌感染的疫苗奠定基础.[方法]根据GenBank中铜绿假单胞菌OprI基因序列设计引物,扩增、鉴定OprI基因,将OprI基因扩增产物与pMG36c质粒双酶切、连接,构建重组质粒pMG36c-OprI;对乳酸乳球菌MG1363菌株感受态细胞制备和电转化方法优化,将重组质粒电转化MG1363感受态细胞,酶切和PCR反应及测序鉴定转化情况,SDS-PAGE电泳检测OprI蛋白表达情况;采用灌胃、皮下注射和鼻腔喷雾接种小鼠方式评价载体疫苗安全性和异常毒性,采用免疫小鼠、攻毒试验评价免疫效果.[结果]重组载体疫苗构建成功;感受态细胞制备和电转化优化条件:细菌OD600=0.5,复壮时间 3 h,质粒添加量 100 ng和转化电压 2.5 kV时,转化效率可达到 425 CFU/μg DNA;载体疫苗安全性、异常毒性试验合格;载体疫苗对小鼠的保护率为76.67%;免疫后,小鼠血清抗体IgG和IgE水平显著高于免疫前(P<0.01),载体疫苗免疫组水平显著高于MG1363菌株免疫组(P<0.01).[结论]构建了安全、无异常毒性、免疫效果较好的表达铜绿假单胞菌外膜蛋白I的乳酸乳球菌重组载体疫苗,为有效防治铜绿假单胞菌感染提供了坚实的技术支撑.
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关键词
铜绿假单胞菌外膜蛋白Ⅰ乳酸乳球菌重组载体疫苗免疫效果Pseudomonas aeruginosaOuter membrane protein ⅠLactobacillus lactisRecombinant vector vaccinesImmune effect
分类号
R392（医学免疫学）
栏目名称
DOI
10.3969/j.issn.0517-6611.2025.07.015
发布时间
2025-04-29（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）
基金项目
黑龙江省科学院科学研究基金项目（KY2022SW01）
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