换一批
换一批HPV18E6原核表达载体的构建及3×flag-HPV18E6融合蛋白的诱导表达
Construction of HPV18E6 prokaryotic expression vector and induced expression of 3×flag-HPV18E6 fusion protein
摘要目的 构建pET-22b-3×flag-HPV18E6原核表达载体,并在大肠杆菌中诱导表达融合蛋白.方法 用RT-PCR法从HeLa细胞中扩增出带HindⅢ、SalⅠ酶切位点的HPV18E6基因片段,将HPV18E6基因片段克隆到p3×flag-myc-CMV-24载体上.然后设计特异性引物扩增3×flag-HPV18E6重组基因片段,将该片段连接到pET-22b原核表达载体上,在大肠杆菌中诱导表达3×flag-HPV18E6融合蛋白,经Western blot鉴定.结果 pET-22b-3×flag-HPV18E6原核表达载体构建正确,IPTG诱导以浓度0.1 mmol/L,时间2 h为宜,表达的3×flag-HPV18E6融合蛋白相对分子质量约20 ku.结论 成功构建pET-22b-3×flag-HPV18E6原核表达载体并诱导3×flag-HPV18E6融合蛋白表达.
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主题词
蛋白(Egg White)人乳头瘤病毒18(Human papillomavirus 18)原核细胞(Prokaryotic Cells)遗传载体(Genetic Vectors)基因表达(Gene Expression)
DOI
10.3969/j.issn.1000-1492.2011.02.003
发布时间
2011-05-03
基金项目
安徽省自然科学基金
安徽省高等学校省级自然科学研究项目
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