换一批摘要目的 利用Taqman技术,建立荧光定量逆转录聚合酶链反应(FQ-RT-PCR)方法,对肺癌组织中Ⅳ型胶原α3链[α3 (Ⅳ)] mRNA表达进行定量及蛋白表达水平检测,评价其临床应用价值.方法 在α3(Ⅳ)基因NC1结构域编码序列设计一对引物和一条Taqman探针;优化反应体系的条件,以不同质粒DNA含量为标准品和其循环阈值(Ct值)制作标准曲线,检测肺癌组织中α3(Ⅳ) mRNA含量;并对本方法进行方法学评价.Western blot法检测tumstatin蛋白表达情况.结果 成功建立了α3(Ⅳ)基因mRNA表达实时荧光定量PCR检测方法,检测灵敏度为800 拷贝/μl;在10.3～10.8 拷贝/μl之间与Ct值具有很好的线性关系;PCR扩增效率为99 4%;肺癌组织中α3(Ⅳ) mRNA表达定量检测发现,48例肺癌患者肺癌组织α3(Ⅳ) mRNA组含量显著低于癌旁组织,差异有统计学意义（P<0.01）,肺癌组织中tumstatin蛋白表达下调/缺失率显著高于癌旁组织（P<0.01）.临床监测发现肺癌患者癌组织α3(Ⅳ) mRNA含量检测和TNM分期程度具有相关性(P<0.05).结论 α3(Ⅳ)与肺癌的发生发展关系密切,FQ-RT-PCR检测α3(Ⅳ) mRNA的表达为肺癌转移、预后判断、临床治疗等奠定良好基础.
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栏目名称
DOI
10.3969/j.issn.1000-1492.2012.01.014
发布时间
2012-03-15（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）
基金项目
安徽省科技厅科技攻关项目（08010302187）；
安徽省自然科学基金（11040606M208）
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