换一批肠出血性大肠杆菌z4832基因缺失突变株的构建
Construction of z4832 defective mutant of enterohemorrhagic Escherichia coli
摘要目的 利用Red重组系统的同源重组功能,敲除肠出血性大肠杆菌O157∶H7 (EHEC O157∶H7)的乙酰转移酶基因z4832,构建z4832基因缺失突变株.方法 EHECO157∶H7的基因组作为模板,PCR扩增目的基因两侧的同源臂序列;将上下游同源臂连接于pUC19-kana质粒上卡那霉素(kana)抗性基因的两端;PCR扩增获得中间嵌合卡那霉素抗性基因的同源臂线性片段,利用质粒pKD46介导的重组技术敲除z4832基因,利用pCP20质粒介导的重组技术去除抗性标记.PCR扩增及DNA测序验证目的基因缺失后,测定突变株及野生株的生长曲线,检测在抗菌药物氧氟沙星中的存活率.结果 成功构建EHEC O157∶H7 z4832基因缺失突变株.z4832缺失突变株生长速度与野生株差异无统计学意义,但在含氧氟沙星的LB培养基中突变株存活率升高(P＜0.05),在含氧氟沙星的M9培养基中存活率下降(P＜0.05).结论 构建z4832缺失突变株,研究z4832与肠出血性大肠杆菌耐药性之间的关系,为进一步研究乙酰转移酶在EHEC O157∶H7中的作用机制奠定了基础.
更多相关知识
医学主题词
肠出血性大肠杆菌(Enterohemorrhagic Escherichia coli)突变(Mutation)基因缺失(Gene Deletion)肿瘤转移(Neoplasm Metastasis)基因(Genes)
分类号
Q939.93（应用微生物学）
栏目名称
发布时间
2016-10-21（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）
基金项目
国家自然科学基金（81401643）
- 浏览125
- 被引0
- 下载17
相似文献
- 中文期刊
- 外文期刊
- 学位论文
- 会议论文
