摘要目的 包装包含卡波肉瘤相关疱疹病毒(KSHV)K15P及其突变体K15P(YF)基因的慢病毒颗粒,并对此基因在EA.hy926细胞内稳定表达进行研究.方法 通过PCR方法扩增获得KSHV K15P、K15P(YF)基因片段,使用限制性内切酶Not Ⅰ与BamH Ⅰ酶切和TA克隆法构建T载体与慢病毒表达载体pHAGE-CMV-MCS-K15P-Puro、pHAGE-CMV-MCS-K15P(YF)-Puro,通过lip2000将构建好的慢病毒表达载体与两种辅助包装质粒PSPAX2和pMD2.g共转染HEK 293T细胞,48 h后收集慢病毒.慢病毒感染EA.hy926细胞并通过嘌呤霉素筛选稳定表达株,Western blot检测K15P与K15P(YF)蛋白的表达.Transwell与CCK8实验检测K15P对内皮细胞的增殖迁移影响.结果 成功构建慢病毒表达载体,筛选出稳定表达K15P、K15P(YF)蛋白的EA.hy926细胞.在EA.hy926细胞Transwell迁移实验中,与空载体组和K15P突变体组(0.98±0.23)比较,K15P组(2.25±0.15)的EA.hy926细胞的迁移能力明显增强(P＜0.01),三组细胞迁移量差异有统计学意义(F=113.5,P＜0.01);CCK8增殖活性实验中,与空载体组和K15P(YF)组(109.23±12.58)比较,K15P组(138.69±7.47)的EA.hy926细胞的增殖能力明显增强(P＜0.01),三组细胞增殖活性差异有统计学意义(F =40.78,P＜0.01).结论 K15P蛋白增强了内皮细胞的增殖与迁移,而K15P(YF)突变体的促进细胞增殖迁移能力减弱,提示K15P蛋白可能在KS的发生发展中参与重要作用.