换一批
换一批摘要目的 探究ATG5介导人脐静脉内皮细胞外泌体对小鼠胸主动脉平滑肌细胞增殖的影响.方法 利用0.1％Ⅱ型胶原酶灌注消化法获得原代人脐静脉内皮细胞;利用组织块贴壁法分离原代小鼠胸主动脉平滑肌细胞;利用超速离心法提取内皮细胞外泌体;利用共聚焦高内涵成像分析仪示踪平滑肌细胞摄取内皮细胞外泌体;利用siRNA干扰内皮细胞ATG5蛋白表达;利用高内涵DPC成像模式分析平滑肌细胞增殖能力.结果 成功得到活性好、纯度高的人脐静脉内皮细胞和小鼠胸主动脉平滑肌细胞.超速离心法获得的内皮细胞外泌体经免疫印迹鉴定,呈Hsp70、TSG101、CD9和CD63阳性.高内涵示踪结果显示平滑肌细胞在共培养30min后开始摄取内皮细胞外泌体,共培养4h后,平滑肌细胞摄取的外泌体明显增多.高内涵监测结果显示,与对照组比较,ATG5干扰组内皮细胞分泌的外泌体在浓度为200μg/ml时能够明显抑制平滑肌细胞的增殖.结论 ATG5可通过介导内皮细胞外泌体调控平滑肌细胞增殖.
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