乳源六肽通过FoxO3a-MnSOD通路减少酒精诱导的氧化应激缓解肝损伤

Milk derived hexapeptide reduces alcohol-induced oxidative stress and alleviates liver injury through FoxO3 a-MnSOD signaling pathway

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摘要目的研究乳源六肽脯氨酸-甘氨酸-脯氨酸-异亮氨酸-脯氨酸-天冬酰胺(PGPIPN)和其截短五肽脯氨酸-甘氨酸-脯氨酸-异亮氨酸-脯氨酸(PGPIP)缓解小鼠慢性酒精性肝损伤及其相关的分子机制.方法 60只昆明小鼠,随机均分为对照组、模型组、谷胱甘肽(GSH)组、PG-PIPN组、截短五肽PGPIP组.采用梯度酒精灌胃的方法建立小鼠慢性酒精性肝损伤模型,造模的同时给予药物干预,共12周.肝脏HE染色分析各处理组对小鼠酒精性肝损伤的病理学影响.体外分离培养小鼠原代肝细胞和人正常肝细胞系L-02,水溶性四氮唑-1(WST-1)细胞增殖及细胞毒性检测确定各种细胞合适的PGPIPN诱导浓度.持续诱导L-02细胞不同时间,Western blot检测人叉头框蛋白O3(FoxO3a)和磷酸化FoxO3a蛋白质的表达,确定合适的诱导时间.免疫荧光染色检测FoxO3a在L-02细胞中的亚细胞定位.实时荧光定量PCR(qRT-PCR)检测不同处理组小鼠原代肝细胞和L-02细胞FoxO3a和锰超氧化物歧化酶(Mn-SOD)基因mRNA的变化.结果 PGPIPN组和PGPIP组病理学检查类似GSH组,小鼠肝脏损伤明显减轻.分别选择中浓度和高浓度PGPIPN诱导小鼠原代肝细胞和L-02细胞.在16 h,L-02细胞FoxO3a蛋白表达显著增加,并且FoxO3a蛋白主要表达于细胞核内.此外,在相应剂量PGPIPN诱导后,两种类型细胞中mRNA水平的显著增加.结论 PG-PIPN和截短五肽PGPIP能减少小鼠慢性酒精性肝损伤,其机制可能是通过FoxO3a-MnSOD信号通路,减少酒精诱导的氧化应激从而发挥作用.