换一批
换一批摘要目的 构建小鼠TDO2 基因条件性敲除打靶载体,为建立 TDO2 基因条件性敲除小鼠奠定基础.方法 根据CRISPR/Cas9 技术原理,设计并构建单链向导RNA(sgRNA)和Donor 载体,以 TDO2-201(ENSMUST00000029645.13)转录本的外显子 3 作为敲除区,在打靶基因两侧各放置一个Loxp元件,建立条件性敲除TDO2 第3 号外显子的条件性基因打靶载体.将CRISPR/Cas9 复合体和Donor载体显微注射到C57BL/6 小鼠的受精卵中,获得阳性F0 小鼠,再将阳性F0 代小鼠与 C57BL/6 小鼠交配获得 F1 代小鼠,并经PCR和基因测序鉴定F1 代小鼠基因型.结果 结果证实所构建的TDO2 基因条件性敲除打靶载体符合设计要求,成功繁育并鉴定出B6/JGpt-TDO2em1Cflox/Gpt小鼠.结论 成功构建了小鼠TDO2 基因条件性敲除打靶载体,为后续进一步构建TDO2 基因条件敲除小鼠奠定了基础.
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栏目名称
基础医学研究
DOI
10.19405/j.cnki.issn1000-1492.2023.07.004
发布时间
2023-08-08
基金项目
安徽省自然科学基金资助项目
安徽省高校协同创新项目
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