摘要目的 构建SHP2E76K突变的小鼠模型,利用其间充质干细胞(MSC)研究激活突变引发的SHP2蛋白相分离对其细胞增殖能力的影响及其机制.方法 将Ptpn11E76K-neo/+的C57BL/6J小鼠与Mx1-cre工具鼠杂交,得到所需要的Mx1-cre;Ptpn11+/+和Mx1-cre;Ptpn11E76K/+小鼠,并对后者注射pI-pC以诱导Cre酶的表达,使Ptpn11在骨髓MSC中突变.从Mx1-cre;Ptpn11+/+和Mx1-cre;Ptpn11E76K/+小鼠体内分离培养MSC,通过细胞免疫荧光染色确定所分离的细胞为MSC.以Ptpn11+/+的MSC为对照组,Ptpn11E76K/+的MSC为实验组,通过加药将两种细胞分成6组:Ptpn11+/+组;Pt-pn11+/++SHP099组;Ptpn11+/++ET070组;Ptpn11E76K/+组;Ptpn11E76K/++SHP099组;Ptpn11E76K/++ET070组.免疫荧光染色法观察6组细胞内SHP2蛋白相分离的差异,Western blot法检测6组MSC中SHP2蛋白表达水平的差异.CCK-8检测相分离被影响之后细胞增殖能力的改变.提取实验组与对照组细胞总蛋白通过Western blot法检测ERK/p-ERK、AMPK/p-AMPK、mTOR/p-mTOR等蛋白的表达水平.结果 小鼠基因型鉴定证实得到Mx1-cre;Pt-pn11E76K/+和Mx1-cre;Ptpn11+/+小鼠并分离出原代Pt-pn11+/+和Ptpn11E76K/+骨髓MSC.与Ptpn11+/+组相比,Pt-pn11E76K/+组的SHP2蛋白产生更多的相分离冷凝物;与Pt-pn11E76K/+组相比,Ptpn11E76K/++SHP099组和Ptpn11E76K/++ET070组SHP2蛋白凝聚成的冷凝物在均明显减少;Western blot检测各组SHP2蛋白表达水平差异无统计学意义;与Pt-pn11+/+组相比,Ptpn11+/++SHP099组和Ptpn11+/++ET070组MSC的增殖能力下降,细胞内p-ERK和p-mTOR蛋白表达减少,p-AMPK蛋白表达增加;与Ptpn11E76K/+组相比,Ptpn11E76K/++SHP099组和Ptpn11E76K/++ET070组MSC的增殖能力下降,细胞内p-ERK和p-mTOR蛋白表达减少,p-AMPK蛋白表达增加.结论 SHP2的相分离通过刺激AMPK-mTOR信号通路的表达参与了SHP2E76K激活突变的MSC的增殖能力改变.