摘要目的 探讨转录因子LIM结构域蛋白4(LMO4)在小鼠胚胎干细胞(mESC)分化为血管内皮细胞及新生血管中的作用.方法 使用逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)方法从小鼠红系白血病细胞系MEL)中克隆小鼠Lmo4的cDNA,并亚克隆到含有小鼠胎肝激酶-1(Flk-1)启动子驱动表达Gfp的载体(pFG),构建成血管细胞特异性表达的LMO4的载体pFLG.将表达载体转染mESC,通过遗传霉素(G418)筛选,获得mESC/pFG和mESC/pFLG的细胞株;将这些mESC在体外进行自我分化,以形成4 d和10 d的胚胎体(EB),并进行成血管细胞的集落细胞形成实验(BL-CFC);以10 d-EB进行新生血管出芽实验,观察和分析出芽长短、数目;运用蛋白免疫印迹(Western blot)或定量RT-PCR方法对目的基因的表达进行检测.结果 PCR结果证实成功构建了成血管细胞特异性表达的LMO4的表达载体pFLG.通过G418筛选获得mESC/pFG和mESC/pFLG的细胞株.这些mESC通过自我分化形成4 d-EB和10 d-EB,荧光显微镜下观察到EB内均可见绿色荧光标记的细胞.Western blot检测显示:与mESC相比,4 d-EB和10 d-EB的LMO4的表达显著增加.过量表达LMO4的mESC/pFLG产生BL-CFC效率为(7.70％ ±1.27％),而mESC/pFG细胞产生BL-CFC效率为(1.15％ ±0.48％),二者差异有统计学意义(P=0.021).定量RT-PCR结果显示,Flk-1、C-kit、Tie-2、Ve-cad基因在10 d-EB/pFLG中的表达,均较10 d-EB/pFG中表达增加2倍以上.新生血管出芽实验结果显示,10 d-EB/pFLG的新生血管数量和长度均较10 d-EB/pFG增加(P<0.05).结论 过量表达LMO4促进mESC形成成血管细胞,并有利于血管内皮细胞的分化和血管的新生.