摘要目的 构建髓系特异性Spi1 基因敲除小鼠并分析其基因型,为疾病病理机制及药物靶点研究提供动物模型基础.方法 根据CRISPR/Cas9 技术原理和Cre/LoxP系统,设计并构建sgRNA和Donor载体,以第2 号外显子(Exon 2)所在的转录本为敲除区域,在Exon 2 两侧各放置同向Loxp元件;将 Cas9 蛋白、sgRNA 和 Donor 载体混合显微注射到C57BL/6J小鼠的受精卵中,移植受精卵到假孕的C57BL/6J母鼠的子宫中,19～20 d后获得F0 代.将阳性F0 代小鼠与C57BL/6J小鼠交配,得到稳定的F1 代Spi1flox/+小鼠.F1 代Spi1flox/+小鼠雌雄自交得到Spi1flox/flox小鼠.Spi1flox/flox与Lyz2-Cre+小鼠交配得到 Spi1flox/+/Lyz2-Cre+小鼠,再将其与Spi1flox/flox交配,得到的Spi1flox/flox/Lyz2-Cre+小鼠为髓系特异性Spi1 基因敲除(KO)小鼠;Spi1flox/flox/Lyz2-Cre-小鼠作为野生型(WT)小鼠.提取WT和KO小鼠DNA,PCR扩增后琼脂糖凝胶电泳鉴定基因型;Western blot检测WT和KO小鼠免疫细胞中脾病灶形成病毒前病毒整合癌基因-1/富含嘌呤盒1(PU.1)表达.结果 PCR鉴定结果显示,采用flox引物鉴定时仅扩增出 220 bp 条带的小鼠,即基因型为Spi1flox/flox纯合子,采用Lyz2-Cre引物鉴定时扩增出700 bp的小鼠,基因型为Lyz2-Cre+;Western blot结果显示,与WT组比较,KO组小鼠骨髓来源巨噬细胞(BMDMs)和腹腔原位巨噬细胞(PM)中的PU.1 不表达(P<0.01);T细胞中KO小鼠PU.1 表达水平与 WT 小鼠差异无统计学意义;PCR 和Western blot结果均表明髓系特异性Spi1KO小鼠构建成功.结论 成功构建和鉴定髓系特异性Spi1KO小鼠,为进一步揭示PU.1 在免疫调节中的潜在机制研究提供动物模型基础.