换一批人源性RPL22基因的原核表达与纯化及功能分析
Prokaryotic expression,purification and functional analysis of human RPL22 gene
摘要目的 了解人类核糖体蛋白L22(RPL22)基因的生物信息学,原核表达与纯化人类RPL22重组蛋白,在体外合成人类RPL22(标记为试剂M),研究试剂M对NSCLC A549细胞增殖、周期、凋亡的影响,分析试剂M和顺铂(DDP)联合进行化疗的效果.方法 分析RPL22生物信息学.PCR克隆RPL22基因,进行单链寡核苷酸的设计及合成,获得目的基因后连接pET-28α载体,构建pET-28α-RPL22重组质粒,转化大肠埃希菌感受态细胞DH5α,采用十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)、Western blot分析重组蛋白RPL22的表达情况.CCK-8检测试剂M和DDP在A549细胞中的半抑制率(IC50)以及试剂M对A549细胞增殖的影响;流式细胞术检测试剂M对A549细胞凋亡、周期的影响;qPCR、Western blot检测试剂M和DDP分别对磷脂酰肌醇-3-激酶/蛋白激酶B(PI3K/AKT)、腺苷5'-单磷酸激活蛋白激酶/哺乳动物雷帕霉素靶蛋白(AMPK/mTOR)信号通路的影响.结果 RPL22蛋白为不稳定亲水性蛋白质.诱导表达的重组蛋白经溶解纯化后获得了高浓度重组蛋白.在A549细胞中,试剂M的IC50为400 μg/L,DDP的IC50为10 μmol/L,试剂M抑制细胞增殖,其浓度与细胞活性成反比;试剂M(200 μg/L)与DDP(2.5 μmol/L)联合运用时,效果与单独使用10 μmol/L DDP抑制增殖比相似;试剂M能诱导G2细胞周期停止、促进细胞凋亡,且可能参与PI3K/AKT、AMPK/mTOR通路的调节.结论 该研究首次克隆得到人类RPL22重组蛋白,使其成功纯化表达.
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关键词
核糖体蛋白L22非小细胞肺癌生物信息学分析原核表达与纯化功能分析ribosomal protein L22non-small cell lung cancerbioinformatic analysisprokaryotic expression and purificationfunctional analysis
分类号
R56（呼吸系及胸部疾病）
栏目名称
DOI
10.19405/j.cnki.issn1000-1492.2024.10.013
发布时间
2024-12-10（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）
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