摘要目的 构建一种丙戊酸(VPA)和PTEN腺病毒(ADV)联合应用的PTEN基因下调ASD幼鼠模型(VPA-ADV),并与VPA和ADV两种传统模型进行比较,证明此模型在针刺治疗ASD造模的优势.方法 将怀孕12.5 d的Wistar大鼠随机分为2组,分别给予VPA(600 mg/kg)和等剂量的生理盐水作为VPA和正常组.记录新生幼鼠体质量、睁眼时间、尾巴畸形情况.正常组幼鼠随机分为3组,每组10只,设置为:正常(NS)组、病毒(ADV)组和病毒阴性对照(ADV-NC)组;VPA组幼鼠20只,随机分为2组,每组10只,设置为丙戊酸(VPA)组、丙戊酸结合病毒干扰(VPA+ADV)组.观察5组幼鼠出生后的体质量、尾长、弯尾、负趋地性反射时间、骨骼畸形情况、21日龄神经行为学表现、脑组织电镜髓鞘结构;通过免疫组化、Western blot、q-PCR方法检测PTEN、PI3K、AKT、GSK3β、MBP表达水平.结果 与NS组孕鼠活产幼鼠对比,VPA组孕鼠活产幼鼠畸形率显著增加,体质量增长慢,尾长增长慢,负趋地性反射时间长(P＜0.05).3个模型组较NS组体质量增长慢,尾长增长慢,负趋地性反射时间长(P＜0.05),且VPA+ADV组表现最为显著.3组模型旷场试验跨中央格时间、跨边缘格次数、跨边缘格时间与NS组差异均有统计学意义(P＜0.05).自我捋毛实验中VPA+ADV组互动次数最少(P＜0.05),且挖掘、自我捋毛次数最多(P＜0.05).三箱社交实验中,VPA+ADV组进入社交箱平均次数以及停留时间最短(P＜0.05),其在水迷宫实验中找到平台所用的时间最长,穿越第三象限次数最少(P＜0.05).透射电镜观察胼胝体区髓鞘板层结构显示NS组结构清晰完整.与NS组相比,ADV-NC组髓鞘结构近似,3个模型组髓鞘结构分层、断裂,存在ASD病理改变及髓鞘损伤,其中VPA+ADV组髓鞘增厚、分层明显,严重的可见崩解.免疫组化、Western blot及q-PCR结果均表明VPA+ADV组的PTEN表达下调约50％,最为明显.AKT、MBP均表达增高,GSK3β表达降低(P＜0.05).免疫组化和Western blot结果表示3个模型组与NS组PI3K表达无统计学差异,但q-PCR结果表示3个模型组的PI3K-mRNA表达显著提高(P＜0.05),其中VPA+ADV组变化最为显著.结论 VPA+ADV新型PTEN-ASD模型更符合ASD髓鞘发育异常的表现,且较2种传统模型有着造模价格低、活产率高、PTEN基因下调明显的优势.