换一批重组人凝血因子Ⅶ稳定转染细胞株的构建及鉴定
Construction and characterization of recombinant human coagulation factorⅦ stable transfected cell lines
摘要目的 构建稳定表达重组人凝血因子Ⅶ(rhFⅦ的单克隆人胚胎肾293细胞株(HEK293),评估其rhFⅦ表达量及促凝血生物活性.方法 重组质粒pc DNA3.1-EGFP-FⅦ转染HEK293细胞,验证转染系统的有效性.重组质粒pcDNA3.1-FⅦ转染HEK293细胞,遗传霉素(G418)筛选单克隆稳定转染细胞株,逆转录聚合酶链式反应(RT-PCR)鉴定FⅦ基因的转录,十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳和Western blot检测单克隆稳定转染细胞株上清液中的rhFⅦ表达水平.酶联免疫吸附(ELISA)实验测定rhFⅦ浓度,人凝血因子Ⅶ效价法测定rhFⅦ的促凝血活性.结果 转染pcDNA3.1-EGFP-FⅦ的HEK293细胞呈现绿色荧光,pcDNA3.1-FⅦ瞬时转染HEK293细胞后成功表达rhFⅦ.筛选得到单克隆稳定转染细胞株,RT-PCR鉴定FⅦ基因整合至单克隆稳定转染细胞株基因组,CCK-8检测到细胞活力良好,细胞上清液纯化后获得rhFⅦ单一条带.rhFⅦ表达量最高为(1.27±0.09)mg/L,促凝血活性最高为(380.29±13.80)%.结论 筛选获得的单克隆HEK293细胞株,能够高效、稳定表达具备优良促凝血生物活性的rhFⅦ蛋白.
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关键词
重组人凝血因子Ⅶ稳定表达HEK293细胞单克隆稳定转染细胞株血友病recombinant human coagulation factor Ⅶstable expressionHEK293 cellsmonoclonal stable trans-fected cell lineshemophilia
分类号
R554（血液及淋巴系疾病）
栏目名称
DOI
10.19405/j.cnki.issn1000-1492.2026.01.004
发布时间
2026-04-07（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）
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