换一批C-C趋化因子受体6基因敲除小鼠的构建及鉴定
Construction and identification of C-C motif chemokine receptor type 6 gene knockout mice
摘要目的 构建C-C趋化因子受体6(CCR6)基因纯合敲除小鼠模型,为后续开展体内功能研究奠定关键的动物模型基础.方法 采用规律成簇间隔短回文重复序列及其关联蛋白9系统(CRISPR/Cas9)技术构建Ccr6-/-小鼠.提取鼠尾基因组DNA,通过PCR并结合琼脂糖凝胶电泳进行小鼠基因型鉴定;应用HE染色观察小鼠的心脏、肝脏、肺及肾脏等主要组织器官的病理学形态;利用Western blot检测小鼠血液、脾脏和骨髓中CCR6蛋白的表达水平;通过流式细胞术检测小鼠脾脏中T细胞和巨噬细胞的比例,以分析CCR6基因敲除对主要免疫细胞群体比例的影响.结果 琼脂糖凝胶电泳结果显示,经引物鉴定,仅在307 bp位置扩增出单一特异性条带的小鼠即为Ccr6-/-小鼠;HE染色观察显示,Ccr6+/+小鼠与Ccr6-/-小鼠主要组织器官的细胞形态未见明显差异;Western blot分析表明,Ccr6-/-小鼠主要组织中CCR6蛋白表达基本缺失,敲除效果良好;流式细胞术分析结果表明,CCR6基因缺失可显著增加CD8+T细胞的比例,而CD4+T细胞和巨噬细胞的比例保持不变.结论 成功利用CRISPR/Cas9技术构建了CCR6基因纯合敲除小鼠模型,为深入开展CCR6的体内功能机制研究提供了稳定可靠的动物模型基础.
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关键词
C-C趋化因子受体6基因敲除CRISPR-Cas9基因型鉴定聚合酶链式反应蛋白表达C-C motif chemokine receptor 6gene knockoutCRISPR-Cas9genotypingpolymerase chain reac-tionprotein expression
分类号
R593.22（全身性疾病）
栏目名称
DOI
10.19405/j.cnki.issn1000-1492.2026.03.004
发布时间
2026-05-18（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）
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