TRPC6基因对过氧化氢诱导大鼠脑血管平滑肌细胞炎症反应、氧化应激损伤的影响
Effect of TRPC6 gene on hydrogen peroxide induced inflammatory response and oxidative stress damage in rat cerebral vascular smooth muscle cells
摘要目的 探究瞬时受体电位阳离子通道蛋白6(TRPC6)基因对过氧化氢(H2O2)诱导大鼠脑血管平滑肌细胞(VSMCs)损伤的影响.方法 于2022年3-12月完成研究.分离大鼠脑基底动脉VSMCs,采用随机数字表法分为五组:空白组、H2O2组(500 μmol/L H2O2处理6 h)、H2O2+空转染组(500 μmol/L H2O2处理6 h,并转染空载脂质体)、H2O2+TRPC6 siRNA组(500 μmol/L H2O2处理6 h,并转染TRPC6 siRNA)和H2O2+pcDNA3.1 TRPC6组(500 μmol/L H2O2处理6 h,并转染pcDNA3.1 TRPC6).采用人胆囊收缩素/缩胆囊素八肽(CCK-8)法检测细胞增殖活性,流式细胞术检测细胞凋亡,酶联免疫吸附测定检测细胞中白细胞介素(IL)-6、IL-1β、单核细胞趋化蛋白1(MCP-1)、超氧化物歧化酶(SOD)、丙二醛,DCFH-DA荧光探针法检测细胞中活性氧水平.结果 与H2O2组比较,H2O2+TRPC6 siRNA组D(λ)450 nm值明显升高,细胞凋亡率明显降低(P<0.05),H2O2+pcDNA3.1 TRPC6组D(λ)450 nm值明显降低,细胞凋亡率明显升高(P<0.05).H2O2组、H2O2+TRPC6 siRNA组、H2O2+pcDNA3.1 TRPC6组细胞中IL-6含量分别为(159.24±21.65)ng/L、(52.95±12.43)ng/L、(257.48±23.44)ng/L,IL-1β 含量分别为(126.09±19.85)ng/L、(41.67±9.06)ng/L、(248.77±23.32)ng/L,MCP-1含量分别为(89.25±11.73)ng/L、(27.73±5.18)ng/L、(187.61±15.42)ng/L,SOD活性分别为(53.40±8.92)U/mL、(172.33±14.52)U/mL、(23.75±5.63)U/mL,丙二醛含量分别为(91.35±10.41)nmol/mL、(8.29±2.17)nmol/mL、(169.37±14.37)nmol/mL,活性氧水平分别为2.68±0.27、0.76±0.18、5.89±0.34;与H2O2组比较,H2O2+TRPC6 siRNA组IL-6、IL-1β、MCP-1、丙二醛和活性氧明显降低、SOD活性明显升高(P<0.05),H2O2+pcDNA3.1 TRPC6组与之相反.结论 TRPC6基因低/过表达可促进/抑制H2O2诱导VSMCs增殖活性和抑制/促进细胞凋亡,可能与调节炎症反应和氧化应激损伤有关.
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