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灵芝孢子粉含药血清通过Nrf2/HO-1通路减轻OGD/R致HT22细胞的氧化应激损伤

Mechanism of Action of Serum Containing Bioactive Components of Ganodermae Spora in Im-proving Injury Induced by Oxygen-Glucose Deprivation/Reoxygenation in HT22 Cells by Regula-ting the Nuclear Factor Erythroid 2-related Factor 2/Heme Oxygenase-1 Pathway

摘要目的 研究灵芝孢子粉含药血清(serum containing bioactive components of Ganodermae Spora,S-GS)对氧糖剥夺/复氧(oxygen-glucose deprivation/reoxygenation,OGD/R)致小鼠海马神经元HT22细胞损伤的保护机制.方法 采用OGD/R法诱导HT22细胞损伤,加入不同浓度S-GS后,采用CCK-8法检测各组HT22细胞存活率及筛选最佳S-GS浓度,ELISA法测定各组细胞超氧化物歧化酶(superoxide dismutase,SOD)活性和乳酸脱氢酶(lac-tate dehydrogenase,LDH)、丙二醛(malondialdehyde,MDA)水平,AV-PI 流式细胞仪测定 HT22 细胞凋亡率,Western blot 法测定核内核因子 E2 相关因子 2(nucleus nuclear factor E2 related factor 2,N-Nrf2)、血红素加氧酶-1(heme oxygenase,HO-1)、Kelch 样环氧氯丙烷相关蛋白 1(Kelch-like ECH-associated protein 1,Keap1)、胞浆核因子E2相关因子2(cytoplasm nuclear factor E2 related factor 2,C-Nrf2)蛋白表达水平,免疫荧光染色法测定活性氧(reactive oxygen species,ROS)水平及Nrf2核转移情况.结果 S-GS可显著升高HT22细胞中SOD活性,降低MDA、ROS水平及细胞凋亡率;且S-GS可显著升高HO-1、N-Nrf2蛋白表达水平,降低C-Nrf2、Keap1蛋白表达水平并促进Nrf2核转移.10%S-GS+ML385(Nrf2抑制剂)可显著升高细胞凋亡率及Keap1、C-Nrf2蛋白表达水平,降低HO-1、N-Nrf2蛋白表达水平及N-Nrf2荧光强度.结论 S-GS可通过激活Nrf2/HO-1信号通路保护OGD/R诱导的HT22细胞免于氧化应激损伤,灵芝孢子粉可作为改善缺血性脑卒中的潜在药物.

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