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半胱氨酸合成酶与β-氰基丙氨酸合成酶活性检测

Assay for Activities of Cysteine Synthase and β-Cyanoalanine Synthase

摘要植物半胱氨酸合成酶(Cysteine synthase,CSase)和β-氰基丙氨酸合成酶(β-cyanoalanine synthase,β-CAS)分别催化合成半胱氨酸(Cysteine,Cys)和β-氰基丙氨酸(β-Cyanoalanine,β-CA),它们在功能上冗余.本研究以山黧豆、苜蓿和玉米为主要材料,结合电泳对8种常见植物CSase和β-CAS粗酶活性进行了分析.结果表明,检测CSase活性时,8种植物两类粗酶的最适反应时间均为10min,最适pH均为8.0,底物O-乙酰-丝氨酸和Na2 S最适浓度分别是10和5 mmol·L-1.检测β-CAS活性时,8种植物两类粗酶的最适反应时间均为30 min,最适pH均在9~10范围内,底物Cys最适浓度均为3 mmo1·L-1,而底物KCN最适浓度前者为80 mmol·L-1,后者为3 mmol·L-1.8种植物中,CSase活性在种、种内组织间差别不是很大,但β-CAS活性则相反,尤其在茎叶和根中差别较大.

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