换一批
换一批摘要目的:探讨Grb7蛋白SH2结构域的表达及其纯化的方法.方法:将Grb7蛋白SH2结构域编码基因与谷胱甘肽巯基转移酶(GST)标签编码基因构建为融合基因,插入原核表达载体pGEX-4T-1的多克隆酶切位点EcoRⅠ与XhoⅠ之间,挑选测序正确的质粒将其转染至BL 21感受态细胞内,感受态细胞于37 ℃摇培至其OD值达到0.6～0.8后,经0.2 mmol/L IPTG 25 ℃过夜诱导表达融合蛋白,MALDI-TOF质谱检测蛋白纯化产物,SPR生物传感器(Biacore 3000) 检测纯化蛋白与天然配体磷酸化肽段的相互作用.结果:GST-Grb7 SH2 结构域融合蛋白在裂解菌液的上清液中存在,500 ml LB/Amp菌液可纯化得到415 μg GST-Grb7 SH2结构域融合蛋白,MALDI-TOF质谱图上可见明显目的蛋白峰,Biacore 3000检测到纯化蛋白可结合不同浓度的磷酸化肽段配体.结论:运用改进的GST融合蛋白纯化方法可得到具有一定纯度及生物学活性的GST-Grb7 SH2结构域融合蛋白,为该蛋白结构域后续功能研究奠定了基础.
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主题词
蛋白(Egg White)方法(Methods)谷胱甘肽(Glutathione)肿瘤转移(Neoplasm Metastasis)受体, 生长因子(Receptors, Growth Factor)
分类号
R394
栏目名称
DOI
10.3969/j.issn.1000-2200.2012.04.002
发布时间
2012-05-17
基金项目
国家杰出青年科学基金资助项目（30725009）；
国家自然科学基金资助项目（30870502）；
卫生部行业基金资助项目（20082007）；
北京市自然科学基金资助项目（5072037）；
高等学校博士学科点专项科研基金资助项目（20070023021;20070023071）；
111工程（B08007）；
长江学者和创新团队发展计划资助项目（IRT0909）
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