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miR-381-3p靶向调控Sox9对高糖诱导的肾小管上皮细胞凋亡的影响

Effect of miR-381-3p on high glucose-induced renal tubular epithelial cell apoptosis by targeting and regulating Sox9

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摘要目的:探讨微小RNA-381-3p(miR-381-3p)靶向性别决定区Y框蛋白9(Sox9)对高糖(HG)诱导肾小管上皮细胞(HK-2)凋亡的影响.方法:体外培养肾小管上皮细胞系HK-2细胞,将HK-2细胞分为对照组、HG组、HG+miR-NC组(转染miR-NC)、HG+miR-381-3p mimics 组(转染 miR-381-3p mimics)、HG+si-NC 组(转染 si-NC)、HG+si-Sox9 组(转染 si-Sox9)、HG+miR-381-3p mimics+pcDNA 组(miR-381-3p mimics 与 pcDNA 共转染)和 HG+miR-381-3p mimics+pcDNA-Sox9 组(miR-381-3p mimics与pcDNA-Sox9共转染),除对照组外,其余组均用30 mmol/L葡萄糖处理.实时荧光定量PCR(RT-qPCR)法检测HK-2细胞miR-381-3p及Sox9 mRNA表达;流式细胞仪检测细胞凋亡情况;免疫印迹法检测各组HK-2细胞Sox9、B淋巴细胞瘤-2相关蛋白(Bax)、B淋巴细胞瘤-2(Bcl-2)蛋白表达;双荧光素酶报告基因实验验证miR-381-3p与Sox9的靶向关系.结果:与对照组比较,HG组细胞凋亡率、Bax mRNA及蛋白表达水平升高,miR-381-3p、Bcl-2 mRNA及蛋白表达水平降低,差异均有统计学意义(P＜0.05).经targetscan数据库预测显示,miR-381-3p与Sox9 mRNA 3'UTR区有结合位点.过表达miR-381-3p或抑制Sox9表达,细胞凋亡率、Bax、Sox9 mRNA及蛋白表达水平降低,Bcl-2 mRNA及蛋白表达水平升高,差异均有统计学意义(P＜0.05);过表达Sox9可逆转过表达miR-381-3p对HG诱导的HK-2细胞凋亡的抑制作用(P＜0.05).结论:miR-381-3p在HG诱导的肾小管上皮细胞中低表达,过表达miR-381-3p可通过靶向抑制Sox9表达,从而减少了 HG诱导的肾小管上皮细胞凋亡.