微地貌氟磷灰石-聚己内酯纳米纤维三维支架对牙周膜干细胞增殖、矿化及分化的影响
Effect of micro-geomorphic fluorapatite-polycaprolactone nanofiber three-dimensional scaffolds on the proliferation,mineralization and differentiation of periodontal ligament stem cells
摘要目的:分析微地貌氟磷灰石(FA)-聚己内酯(PCL)纳米纤维三维支架对牙周膜干细胞增殖、矿化及分化的影响.方法:构建大鼠模型分为 3组,其中阴性对照组植入胶原凝胶,观察组植入微地貌FA-PCL纳米纤维三维支架,空白对照组不做任何处理,对比牙周膜改建相关因子.取正畸拔除的年轻恒牙牙周组织,原代培养并分离筛选出牙周膜干细胞;分别接种于FA-PCL纳米纤维三维支架和PCL纳米纤维三维支架,再将细胞随机分为A~F组:A组,加入终质量浓度为 10 ng/mL的牙龈卟啉单胞菌脂多糖(PG-LPS)+FA-PCL组;B组,加入10 ng/mL的PG-LPS+PCL组;C组,加入10 μg/mL的PG-LPS+FA-PCL组;D组,加入 10 μg/mL的PG-LPS+PCL组;E组,纯FA-PCL组;F组,纯PCL组.观察细胞增殖、分化、矿化活性的变化.结果:空白对照组、阴性对照组及观察组骨小梁数目(Tb.N)、组织矿物质密度(TMD)、骨体积分数(BV/TV)、骨矿物质密度(BMD)、骨小梁厚度(Tb.Th)、骨小梁分离度(Tb.Sp)水平差异有统计学意义,其中观察组Tb.N、TMD、BV/TV、BMD、Tb.Th水平最高,Tb.Sp水平最低(P<0.05~P<0.01);空白对照组、阴性对照组及观察组大鼠组织HE染色病理学评分、白细胞介素(IL)-6、IL-1b水平差异无统计学意义(P>0.05);而观察组单核细胞趋化蛋白-1水平最低(P<0.05).A组和B组细胞在24h和48h时增殖能力均高于其余各组(P<0.05),但A组和B组间细胞增殖能力差异无统计学意义(P>0.05);Runx2、Spp1级碱性磷酸酶表达水平E组细胞均最高,A组和C组均高于B、D及F组,A组细胞中各指标水平高于C组(P<0.05~P<0.01).采用Von Kossa及茜素红S对牙周膜干细胞进行处理后,可见E组细胞已大量合成并释放磷酸盐和钙盐,且着色严重程度明显高于其余各组;A、C组细胞的Von Kossa及茜素红S染色深度高于B、D组,且A组染色深度高于C组.结论:微地貌FA-PCL纳米纤维三维支架可有效促进牙周膜干细胞增殖,改善牙周膜干细胞的矿化及分化.
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