换一批nsP2-726Pro定点诱变对辛德毕斯病毒XJ-160复制子载体特性的影响
Effects of the Site-directed Mutagenesis at nsP2-726Pro on Replicon Vector Derived from XJ-160 Virus
摘要为观察nsP2-726Pro定点诱变对辛德毕斯病毒(Sindbis virus,SINV)XJ-160复制子载体特性的影响,以XJ160病毒复制子载体pBRepXJ为分子基础,利用定点诱变方法分别构建突变载体pBRep-726L、pBRep-726S、pBRep-726V和pBRep-726A.将新霉素抗性基因(Neomycin~r,Neo~r)克隆到pBRepXJ和各突变载体中,通过细胞培养方法观察nsP2-726Pro定点诱变对载体致细胞病变作用(Cytopathic effect,CPE)的影响;并将增强型绿色荧光蛋白(Enhanced green-fluorcscent protein,EGFP)和海肾萤光素酶(Renilla Luciferase,R.luc)报告基因分别插入到各载体中,定性与定量检测定点诱变对复制子载体自主复制能力的影响.实验结果表明,突变载体pBRep-726V和pBRep-726A在BHK-21细胞中的自主复制能力高于pBRepXJ,所诱发的细胞病变进程更快.替换突变nsP2726Pro→Leu的引入使载体在保持包装能力的同时,完全丧失在细胞上引起CPE的能力.而pBRep-726S则具有中间表型.提示nsP2-726Pro定点诱变在影响XJ-160复制子载体自主复制能力的同时,也改变了CPE的进程.这将为研究辛德毕斯病毒基因组结构与功能的关系及构建非细胞病变的甲病毒载体奠定基础.
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分类号
R373.9
栏目名称
发布时间
2010-06-22（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）
基金项目
"艾滋病和病毒性肝炎等重大传染病防治"科技重大专项（2008ZX10004-001A;2009ZX10004-705）；
国家自然科学基金（30170046;30970160）
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