B型流感疫苗候选株在MDCK悬浮细胞上培养工艺优化研究
Optimization of Influenza B Vaccine Candidates Cultured in MDCK Suspension Cells
摘要为了大规模生产重组B型流感疫苗候选株rIBV,本研究探索了 rIBV在无血清MDCKs细胞上的最佳培养条件,再扩大到生物反应器中优化工艺参数,经过连续传代15代后测定了 MDCKs细胞源毒种rIBV的遗传稳定性和病毒滴度.通过对病毒培养条件进行优化,我们确定了 rIBV在MDCKs细胞上增殖的最佳培养条件是TOI为 72 h、MOI=0.001、CCI 为 4.0 × 106 细胞、TPCK胰酶浓度为 2μg/mL、50%DO 和 pH=7.2±0.5o rIBV在MDCKs细胞上连续传代15代后仍然具有高度遗传稳定性.相比于鸡胚源rIBV株,适应MDCKs细胞生长15代后rIBV株的EID50由10625/mL提高至109,5/mL,TCID50由104.5/mL提高至10825/mL.本研究对重组B型流感疫苗候选株rIBV在MDCKs细胞上的培养工艺进行了优化,获得一株具有高感染力和高病毒滴度的MDCKs细胞源疫苗候选株rIBV,为下游流感疫苗生产及纯化工艺奠定了基础.
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