马尔堡病毒核酸RT-RAA-CRISPR/Cas12a检测方法的建立
Establishment of RT-RAA-CRISPR/Cas12a Detection Assay for Marburg Virus Nucleic Acid
摘要马尔堡病毒病(Marburg virus disease,MVD)是由马尔堡病毒(Marburg virus,MARV)引起的烈性人兽共患传染病,以病毒性出血热为主要特征,病死率高达24%~88%.埃及果蝠是该病毒的自然宿主,而人类及非人灵长类动物则是其主要感染对象.近年来,由于埃及果蝠活动频繁、经济全球化进程加快,MARV外溢风险不断加大.然而,目前全球尚无获批上市的针对MARV的疫苗或特效药物,因此,研发快速精准的MARV检测方法,对全球疫情防控、保障人类健康安全意义重大.本研究将逆转录重组酶介导等温扩增(RT-RAA)技术与CRISPR/Cas12a分子检测系统相结合,以MARV的NP基因为检测靶标,建立了一种高灵敏度、强特异性且高效便捷的MARV核酸可视化检测方法.结果表明,该方法最低可检测到4.9 ×10-1 copies/μL的MARV重组质粒,且与尼帕病毒RNA、埃博拉病毒RNA等多种病毒不存在交叉反应.本方法为MVD的早期诊断与防控提供了重要技术支撑,在临床诊断、疫情监测及公共卫生安全领域具有较高的应用价值.
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