换一批重组人白血病抑制因子(rhLIF)在原核细胞中的表达、纯化及活性测定
Expression,Purification,and Activity Determination of Recombinant Human Leukemia Inhibitory Factor(rhLIF)in Prokaryotic Cells
摘要目的 解决天然白血病抑制因子(leukemia inhibitory factor,LIF)来源受限、纯化工艺复杂及成本过高的问题,通过优化原核细胞表达体系,构建重组人白血病抑制因子(recombinant human leukemia inhibitory factor,rhLIF)的高效表达系统,并进行生物活性验证.方法 通过UniProt数据库获取人源LIF完整的氨基酸序列,构建pColdII-hLIF-cHIS-FX重组质粒;将重组质粒转化至大肠杆菌Origami 2(DE3)感受态细胞中;调整IPTG浓度和温度等参数,优化诱导条件和rhLIF表达;利用镍离子亲和层析、阳离子交换层析和凝胶过滤层析,纯化目的蛋白;采用ELISA法检测rhLIF与LIF受体结合活性,利用圆二色谱分析二级结构.结果 15℃下,0.4 mmol/L IPTG为最佳诱导条件,此时rhLIF在胞内可溶组分中高效表达;经多步层析纯化,获得高纯度rhLIF;ELISA检测可知,rhLIF与LIF商业化抗体MSC-1具有特异性结合能力,EC50 为0.23 μg/mL;圆二色谱分析表明,rhLIF二级结构以α-螺旋为主,占比为97.5%,与LIF的原本α拓扑结构高度一致.结论 成功构建rhLIF高效表达和纯化体系,验证了其生物学活性和正确的二级结构,为后续的结构表征、功能验证等提供了技术基础,推动了rhLIF在生物学领域的应用.
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关键词
重组人白血病抑制因子原核表达与蛋白纯化生物活性测定recombinant human leukemia inhibitory factorprokaryotic expression and protein purificationbioactivity assay
栏目名称
DOI
10.11713/j.issn.1009-4822.2025.06.004
发布时间
2025-11-24（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）
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