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闭锁连接蛋白-1核酸适配体的筛选与初步应用

Selection and Preliminary Application of Zonula Occludens-1 Aptamers

摘要基于配体指数富集系统进化技术筛选闭锁连接蛋白-1的核酸适配体,最终筛选到 15条ZO-1的核酸适配体(APTZO-1).排除线性结构与相似结构后,采用酶联免疫吸附法表征了 9条APTZO-1 与 ZO-1亲和力的大小,排序依次为:APTZO-1 8>APTZO-1 2>APTZO-1 7>APTZO-1 13>APTZO-1 1>APTZO-1 5>APTZO-1 15>APTZO-1 12>APTZO-1 4.采用Cy5荧光基团标记APTZO-1 8(Cy5-APTZO-1 8),证实了其能对人结直肠腺癌细胞(Caco-2)与人脑微管内皮细胞(hCMEC/D3)的ZO-1进行荧光定位与半定量分析,且与基于ZO-1抗体法的免疫荧光与蛋白印迹实验结果基本相似.本研究首次筛选到了ZO-1的系列核酸适配体,有望为ZO-1的荧光标记与半定量分析提供一种新型的、特异性高的工具分子.

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