数字PCR检测尿液循环DNA甲基化的方法学性能评价

An Evaluation of Performanc of Digital PCR for Detection of Circulating DNA Methylation in Urine

二维码有效期 120s

摘要目的基于尿液中的谷胱甘肽硫转移酶P1(glutathione S-transferase pi-1,GSTP1)基因,对微滴式数字PCR(droplet digital PCR,ddPCR)检测循环DNA甲基化的方法学进行性能评价.方法根据甲基化检测试剂盒相关IVD产品的注册指南,主要从引物探针特异性、灵敏度、批内精密度、批间精密度、准确度5个方面对数字PCR检测尿液循环DNA甲基化进行性能评价.结果 GSTP1基因仅在前列腺癌样本中生成明显阳性微滴,在胃癌、肝癌、肾细胞癌、肺癌、膀胱癌、尿道癌、结直肠癌和胰腺癌中不生成阳性微滴,引物探针特异性良好;GSTP1基因的检测限为0.1ng/孔,当DNA输入量大于等于0.1ng/孔时,DNA甲基化情况都可以被检测到,灵敏度较好;批内精密度变异系数均小于6.25％,批间精密度变异系数均小于8.33％,符合CLSI参考文件的标准,表示精密度良好;通过比较数字PCR与荧光定量PCR(Methylight)检测前列腺癌尿液样本GSTP1甲基化情况,相关系数为0.9949,表明两种方法相关性较好,证明数字PCR准确度良好.结论数字PCR检测尿液循环GSTP1基因甲基化的方法在特异性、灵敏度、精密度、准确度均表现良好,符合临床实验室标准,是一种检测尿液循环DNA甲基化的可靠方法.

作者黄薇 ^[1] 蒋涛 ^[2] 逄瑷博 ^[1] 张朋军 ^[3] 田亚平 ^[2] 学术成果认领

作者单位 解放军医学院,北京 100853;中国人民解放军总医院医学创新研究部出生缺陷防控技术研究中心,北京 100853 ^[1] 中国人民解放军总医院医学创新研究部出生缺陷防控技术研究中心,北京 100853 ^[2] 北京大学肿瘤医院暨北京市肿瘤防治研究所介入治疗科恶性肿瘤发病机制及转化研究教育部重点实验室,北京 100142 ^[3]

关键词数字PCR 尿液 DNA甲基化方法学性能评价 ddPCR Urine DNA methylation Methodology Performance evaluation

分类号 R-331

栏目名称 方法研究

DOI 10.11748/bjmy.issn.1006-1703.2023.11.017

发布时间 2024-03-26

基金项目

国家自然科学基金