换一批
换一批丙型肝炎病毒E2蛋白的高效表达及其临床应用
Expression of the E2 protein of hepatitis C virus and its application in clinical diagnosis study
摘要目的:在大肠杆菌中表达丙型肝炎病毒(hepatitis C virus, HCV)E2包膜蛋白,并对其进行初步纯化.用纯化的包膜蛋白检测HCV RNA阳性血清中E2抗体,研究其检测E2抗体的敏感性和特异性.方法:将HCV E2蛋白基因克隆到原核表达载体中,并转化大肠杆菌.用IPTG诱导细菌表达E2蛋白,经离子交换层析纯化蛋白.用纯化的包膜蛋白包被微孔板,经ELISA方法检测HCV RNA阳性血清中的E2抗体.结果:在大肠杆菌表达了相对分子质量为45 000的可溶性E2蛋白,占细菌总蛋白量的21%,纯化后,蛋白纯度为85%.用其检测HCV患者血清171例,E2抗体的检出率为63%.在E2抗体阳性的血清中,部分为抗HCV阴性.结论:E2蛋白的表达及初步纯化的成功,可能用于临床检测.各基因型HCV E2包膜蛋白的抗体之间有交叉反应,在目前的抗HCV诊断试剂中加入可溶性、非融合E2包膜蛋白,可以改善抗HCV诊断试剂的特异性和敏感性.
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