活细胞硫化氢检测新方法

A new methods for determining hydrogen sulfide release in cultured cells

二维码有效期 120s

摘要目的:建立测定活细胞释放微量硫化氢(hydrogen sulfide,H2S)的简易方法.方法:在细胞培养板盖上方黏附滤膜,细胞释放的硫化氢与滤膜上的醋酸锌反应产生硫化锌,采用亚甲基蓝分光光度法测定并计算细胞释放的硫化氢的量.应用该方法分别检测了HepG2细胞和人脐静脉内皮细胞硫化氢的释放量.结果:HepG2细胞添加L-半胱氨酸以及辅酶磷酸吡哆醛后,继续培养12 h,H2S释放量为(859.39±19.12) nmol/(min·106cells)；给予胱硫醚-γ-裂解酶抑制剂炔丙基甘氨酸(DL-propargylglycine,PAG)后,H2S产率下降到(341.34±105.90) nmol/(min·106cells)；胱硫醚-β-合酶抑制剂间羟胺处理后,H2S产率下降到(375.05±174.50) nmol/(min·106cells)；两种酶抑制剂联合使用后H2S释放量显著抑制,为(204.47±97.14) nmol/(min·106cells).人脐静脉内皮细胞也可内源性产生H2S,HUVEC细胞H2S的释放量为(26.23±3.24) nmol/(min·106 cells),约为HepG2细胞产量的1/30.台盼蓝检测细胞活性大于95％,细胞生长状态良好,表明该方法无细胞毒作用,细胞可根据实验需要继续培养.结论:滤膜吸附法简便易行、实用可靠,可应用于活细胞释放硫化氢的测定.