摘要目的:探讨沉默及过表达Nemo样激酶(Nemo-like kinase,NLK)基因对人骨髓间充质干细胞(human mesenchymal stem cells,hBMSCs)神经向分化的作用,并探究小干扰 RNA(small interfering RNA,siRNA)沉默 NLK 基因表达对促进神经化组织工程骨再生的影响.方法:在hBMSCs中分别转染siRNA沉默NLK基因(实验组转染沉默NLK基因的siRNA,对照组转染对照siRNA并记为阴性对照组)或慢病毒过表达NLK基因(实验组感染过表达NLK基因的慢病毒,对照组感染空载体慢病毒并记为空载体组),之后通过实时荧光定量聚合酶链式反应(quanti-tative real-time polymerase chain reaction,qPCR)、蛋白质印迹实验(Western blot)、免疫荧光实验检测敲低、过表达NLK基因对hBMSCs神经向分化的影响.采用6周龄雄性BALB/C nu/nu裸鼠构建皮下异位成骨模型,分为以下4组:① β-磷酸三钙(β-tricalcium phosphate,β-TCP)组,② β-TCP+hBMSCs 成骨诱导组,③ β-TCP+siRNA-阴性对照(negative control,NC)转染的hBMSCs成骨诱导组,④β-TCP+siRNA-NLK转染的hBMSCs成骨诱导组.术后4周获取标本,通过组织形态学染色检测裸鼠体内成骨成神经情况,使用独立样本t检验进行统计学分析.结果:siRNA沉默hBMSCs的NLK基因后,神经相关基因βⅢ微管蛋白(class Ⅲ β-tubulin,TUBB3)、微管相关蛋白2(microtubule association protein-2,MAP2)、可溶性蛋白-100(soluble protein-100,S100)、巢蛋白(nestin,NES)、NG2 蛋白聚糖(NG2 proteoglycan,NG2)及降钙素基因相关肽(calcitonin gene-related peptide,CGRP)表达较阴性对照组显著升高(P＜0.05),TUBB3、MAP2等蛋白表达也升高.慢病毒过表达NLK基因后,与空载体组相比,神经相关基因TUBB3、MAP2、S100及NG2表达水平均显著下降(P＜0.05),TUBB3蛋白表达降低.构建裸鼠皮下异位成骨模型术后4周发现β-TCP+siRNA-NLK 转染的hBMSCs成骨诱导组较其他3组形成更多矿化组织,并且成骨相关标记物BMP2及成神经相关标记物S100显著高表达.结论:siRNA沉默NLK基因可以促进hBMSCs体外神经向分化,并在裸鼠体内异位成骨模型中能够促进神经化组织工程骨的形成.