摘要目的:探讨人源酵母 LAG1 长寿同源物 2(homo sapiens longevity assurance homolog 2 of yeast LAG1,LASS2)去磷酸化对前列腺癌细胞生物学功能的影响及其分子机制.方法:对90例前列腺癌患者的石蜡组织芯片标本进行LASS2免疫组织化学染色,并构建FLAG标签的LASS2全长pcDNA3真核表达载体,转染至HEK 293T细胞后行免疫共沉淀和蛋白质谱检测,分析LASS2的磷酸化位点.根据LASS2磷酸化位点结果构建LASS2 C末端5个去磷酸化突变体的pcDNA3真核表达载体,并稳定转染到高转移潜能前列腺癌PC-3M-1E8细胞系中,通过生长曲线、MTT掺入实验、平板克隆形成实验、细胞划痕实验、Transwell侵袭实验和流式细胞术检测LASS2及其去磷酸化突变体对前列腺癌细胞生物学功能的影响.检测LASS2及其突变体对液泡型ATP酶V0复合体中c亚基(ATP6V0C)表达量及两者相互结合的影响,以及其对液泡型ATP酶活性、细胞外H+浓度和基质金属蛋白酶2(ma-trix metalloproteinase 2,MMP-2)活性的影响,并探索蛋白磷酸酶抑制剂calyculin A对前列腺癌细胞增殖、迁移和侵袭能力的影响.结果:免疫组织化学染色显示前列腺癌组织中LASS2的表达与Gleason分级呈负相关;质谱分析发现LASS2的C末端存在3个磷酸化位点(Ser-341、Ser-348和Ser-349);与野生型LASS2相比,LASS2 S348位点的去磷酸化突变体(LASS2-S348A)能显著增强前列腺癌细胞的增殖能力、锚着不依赖生长能力、细胞迁移能力(细胞迁移率从49.11％±5.62％增加到74.28％±8.77％,P＜0.001)和侵袭能力(穿膜细胞数从129.67±13.65增加到206.67±13.50,P＜0.001),并显著降低S期比例(从44.17％降低到37.90％,P＜0.05)和细胞凋亡率(从48.540％±0.269％降低到 29.700％±0.778％,P＜0.05).LASS2-S348A 去磷酸化突变体虽然不影响 ATP6V0C 的蛋白表达量,但会明显抑制LASS2与ATP6V0C的结合能力,并进而显著增强液泡型ATP酶活性和细胞外H+浓度,最终促进MMP-2的活性;而蛋白磷酸酶抑制剂calyculin A能够显著抑制前列腺癌细胞的增殖、迁移和侵袭.结论:LASS2蛋白C末端S348位点的磷酸化对于LASS2的肿瘤抑制功能至关重要,其分子机制可能是LASS2 S348位点的磷酸化通过增强其与ATP6V0C的结合而抑制液泡型ATP酶活性,进而降低细胞外H+浓度和抑制MMP-2的活性,并最终抑制前列腺癌细胞的侵袭;蛋白磷酸酶抑制剂calyculin A有望成为侵袭性前列腺癌潜在的治疗药物.