大气压放电冷等离子体处理对人牙龈成纤维细胞生物学行为的影响
Effects of cold atmosphere plasma treatment on the biological behavior of human gingival fibroblasts
摘要目的:探究大气压放电冷等离子体(cold atmosphere plasma,CAP)直接作用于人牙龈成纤维细胞(human gingival fibroblasts,HGFs)对其迁移及增殖能力的影响,以及作用效果的剂量相关性.方法:采用常压冷等离子体生物医学实验台作为CAP的发生装置,通过固定放电电压、频率和气流量保证CAP源特性恒定,通过调整放电时间产生不同剂量CAP并处理HGFs.实验分为未经CAP处理组及CAP处理20 s、60 s、120 s、180 s组,检测不同剂量CAP处理后HGFs培养液的温度、酸碱度、活性氧(reactive oxygen species,ROS)含量.通过免疫荧光染色观察不同剂量CAP处理后HGFs的形貌,并测算细胞周长及面积;通过划痕实验检测不同剂量CAP处理后HGFs的迁移能力;通过细胞计数试剂盒检测不同剂量CAP处理后HGFs的增殖能力.结果:随着处理时间的延长,常压冷等离子体生物医学实验台产生CAP的剂量为0~210.6J.不同剂量CAP不改变HGFs培养液温度.随着CAP剂量的不断增加,HGFs培养液pH由初始的8.18±0.06先降低至8.13±0.20,再逐渐升高至8.63±0.15(P<0.05).细胞培养液中H2O2浓度在CAP处理60 s组达到峰值,为(55.96±1.51)μmol/L,随着处理时间的进一步延长逐渐降低至(22.92±0.57)μmol/L(P<0.05).CAP处理20 s组HGFs细胞表面积更大,伸出伪足更多;而CAP处理180 s组的部分HGFs呈现窄长梭形,表面积较CAP处理20 s组减小.相较于未处理组,CAP处理20 s可显著提升HGFs的迁移及增殖能力(P<0.05),而CAP处理180 s会抑制HGFs的迁移及增殖能力(P<0.05).结论:不同剂量CAP处理会改变HGFs培养液的酸碱度及ROS含量;CAP处理对HGFs生物学行为的影响存在剂量相关性,低剂量CAP处理可增强HGFs的迁移能力及增殖能力,而过高剂量CAP处理则会抑制HGFs的迁移及增殖能力.
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