加味四君子汤通过影响5-羟色胺及其受体对斑马鱼肠道出血模型的止血效应及其机制探讨

The hemostatic effect and its mechanism of modified Sijunzi Decoction on the zebrafish intestinal bleeding model through 5-hydroxytryptamine and its receptors

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摘要目的探讨加味四君子汤(党参、茯苓、白术、炙甘草、黄芪、阿胶、茜草)通过影响 5-羟色胺(5-HT)及其受体(5-HT2aR、5-HT2bR)对斑马鱼肠道出血模型的止血作用及其机制.方法以受精后4 d的斑马鱼为研究对象,6 μmol/L辛伐他汀诱导24 h建立肠道出血模型.将斑马鱼利用随机数字表法分为正常组,模型组,加味四君子汤低、中、高质量浓度组(55.6、167、500 mg/L),造模后,给予相应质量浓度加味四君子汤,24 h后收样.观察血小板计数(PLT)及出血情况,比色法检测5-HT含量及Caspase 3/7 活性,实时PCR法检测 5-HT2aR、5-HT2bR、5-HT转运蛋白(SERT)基因表达,蛋白质印迹法检测蛋白激酶B(AKT)、磷酸化AKT(p-AKT)、细胞外调解蛋白激酶(ERK)、磷酸化ERK(p-ERK)蛋白表达.结果模型组肠道出血发生率为 70.0%,加味四君子汤低、中、高质量浓度组出血发生率为36.7%、40.0%、80.0%,肠道止血作用分别为 54%、52%、7%.与模型组比较,加味四君子汤低、中质量浓度组 PLT 减少;各质量浓度组 5-HT 含量升高、5-HT2aR 及5-HT2bR基因表达上调,低、中质量浓度组SERT基因表达上调;中、高质量浓度组Caspase 3/7 活性降低;低、中质量浓度组p-AKT、p-ERK蛋白表达上调(均P<0.05).结论加味四君子汤可减少斑马鱼肠道出血模型的出血发生率及出血程度,其机制可能是通过 5-HT及其受体激活AKT和ERK信号通路实现的.