葛花解酒涤脂汤对酒精性肝病小鼠肝脏组织能量代谢的影响
Effect of Gehua Jiejiu Dizhi Decoction on energy metabolism in liver tissue of alcoholic liver disease mice
摘要目的 检测酒精性肝病(ALD)小鼠肝脏组织能量代谢相关指标水平,并探讨葛花解酒涤脂汤的干预作用.方法 40 只雄性C57BL/6J小鼠任意分为正常对照组、模型组、葛花解酒涤脂汤高剂量组(4.94 g/kg)、葛花解酒涤脂汤低剂量组(2.47 g/kg)和白藜芦醇组(0.40 g/kg),每组 8 只.除正常对照组外,其他各组小鼠先予Lieber-DeCarli对照液体饲料喂养5 d,随后予Lieber-DeCarli酒精液体饲料喂养10 d,第16 天灌胃31.5%乙醇溶液1 次,以制备ALD小鼠模型.造模结束后第2 天起,各干预组灌胃相应药物,每日1 次,连续9 d.苏木素-伊红染色和油红O染色观察肝脏组织脂肪变性情况;分光光度法检测肝脏组织Na+K+-腺苷三磷酸(ATP)酶、Ca2+Mg2+-ATP 酶活性,琥珀酸脱氢酶(SDH)、肝糖原含量;反相高效液相色谱法检测肝脏组织ATP、腺苷二磷酸(ADP)和腺苷一磷酸(AMP)含量,以及AMP/ATP值、总腺苷酸池(TAN)含量、能荷值(EC);实时荧光PCR法检测肝脏组织沉默信息调节因子1(SIRT1)、腺苷酸活化蛋白激酶(AMPK)α2 mRNA表达;蛋白质印迹法检测肝脏组织SIRT1、AMPKα2、AMPKβ1 蛋白表达.结果 与正常对照组比较,模型组小鼠肝脏组织脂肪变性病变明显,肝脏组织Ca2+Mg2+-ATP 酶活性、SDH含量降低,肝糖原含量升高,EC、AMP/ATP 值降低,ATP、ADP、AMP和TAN含量升高,SIRT1、AMPKα2 mRNA表达降低,AMPKβ1 蛋白表达升高(均P<0.05).与模型组比较,葛花解酒涤脂汤高、低剂量组肝脏组织脂肪变性明显减轻,肝脏组织Na+K+-ATP酶活性降低,EC及SIRT1、AMPKα2 mRNA表达升高(均P<0.05);葛花解酒涤脂汤低剂量组Ca2+Mg2+-ATP酶活性、SDH及ATP含量升高(均P<0.05);葛花解酒涤脂汤高剂量组AMP/ATP值升高(P<0.05);葛花解酒涤脂汤高、低剂量组和白藜芦醇组肝脏组织SIRT1 蛋白表达升高(均P<0.05);葛花解酒涤脂汤低剂量组和白藜芦醇组AMPKα2 蛋白表达升高(均P<0.05).与葛花解酒涤脂汤高剂量组比较,葛花解酒涤脂汤低剂量组、白藜芦醇组肝脏组织ATP、TAN含量和EC升高,AMP/ATP值降低(均P<0.05);葛花解酒涤脂汤低剂量组AMPKα2 mRNA表达降低(P<0.05);白藜芦醇组SIRT1、AMPKα2 蛋白表达升高(均P<0.05).与葛花解酒涤脂汤低剂量组比较,白藜芦醇组AMPKβ1 蛋白表达降低(P<0.05).结论 慢性酒精摄入引起的能量代谢改变可能与小鼠ALD发生有关,葛花解酒涤脂汤干预可以改善ALD小鼠肝脏能量代谢异常.
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