摘要目的 基于长链非编码RNA(lncRNA)核富集转录本1(NEAT1)/微小RNA-128-3p(miR-128-3p)通路,探讨升麻素苷改善骨关节炎软骨细胞胆固醇代谢的作用机制.方法 体内实验中,将 60 只C57BL/6 小鼠按随机数字表法分为正常组、假手术组、模型组和升麻素苷组,每组15只.模型组和升麻素苷组采用改良Hulth法构建骨关节炎小鼠模型.升麻素苷组小鼠灌胃升麻素苷[30 mg/(kg·d)],其余各组小鼠给予等量生理盐水,连续8 周.采用苏木精-伊红(HE)染色法观察各组小鼠软骨组织结构;采用实时荧光 PCR法检测各组小鼠软骨组织中lncRNA NEAT1 和miR-128-3p mRNA水平变化;蛋白质印迹法检测各组小鼠关节软骨中ATP 结合盒转运体A1(ABCA1)、肝X核激素受体β(LXRβ)、基质金属蛋白-3(MMP-3)和B淋巴细胞瘤-2 相关X蛋白(Bax)的蛋白表达情况;酶联免疫吸附测定(ELISA)法检测各组小鼠关节滑液中肿瘤坏死因子-α(TNF-α)含量;生化微板法检测各组小鼠关节滑液中总胆固醇水平.体外实验中,按实验需求分为空白对照组、白细胞介素-1(IL-1β)组、IL-1β+升麻素苷组、IL-1β+lncRNA NEAT1 过表达(oe-lncRNA NEAT1)组、IL-1β+oe-lncRNA NEAT1+升麻素苷组、IL-1β+miR-128-3p抑制组、IL-1β+miR-128-3p抑制+升麻素苷组.采用IL-1β诱导软骨细胞24 h构建骨关节炎模型,各组分别给予升麻素苷(90 mg/L)及miR-128-3p抑制剂(50 nmol/L)干预48 h.采用荧光原位杂交检测lncRNA NEAT1 在软骨细胞中的表达;双荧光素酶检测 lncRNA NEAT1 和 miR-128-3p 之间的靶向关系;采用慢病毒质粒过表达 lncRNA NEAT1 转染小鼠软骨细胞;实时荧光 PCR法检测软骨细胞中lncRNA NEAT1 过表达对miR-128-3p mRNA水平的影响;蛋白质印迹法检测lncRNA NEAT1 过表达和miR-128-3p抑制后,软骨细胞中ABCA1、LXRβ、MMP-3 和Bax的蛋白表达.结果 HE染色结果显示,升麻素苷可明显改善骨关节炎软骨组织结构损伤.实时荧光 PCR结果表明,与模型组比较,升麻素苷组软骨组织中的lncRNA NEAT1 mRNA水平降低,miR-128-3p mRNA水平升高(均P<0.05).蛋白质印迹法结果显示,在软骨组织中,与模型组比较,升麻素苷组中ABCA1 和LXRβ蛋白表达升高,而MMP-3 和Bax蛋白表达降低(均P<0.05).ELISA结果显示,与模型组比较,升麻素苷组中TNF-α含量降低(P<0.05).与模型组比较,升麻素苷组中小鼠关节滑液的总胆固醇水平降低(P<0.05).荧光原位杂交结果显示,与IL-1β组比较,IL-1β+升麻素苷组中lncRNA NEAT1 的平均荧光强度减弱(P<0.05).双荧光素酶检测提示,与 miR-NC组 比 较,结合lncRNA NEAT1-WT质粒的miR-128-3p mimics组中的相对荧光素酶活性降低(P<0.05).实时荧光 PCR结果显示,与IL-1β+oe-lncRNA NEAT1 组比较,IL-1β+oe-lncRNA NEAT1+升麻素苷组的lncRNA NEAT1 mRNA水平降低,miR-128-3p mRNA水平升高(均P<0.05).蛋白质印迹法结果表明,与IL-1β+升麻素苷组比较,IL-1β+oe-lncRNA NEAT1+升麻素苷组和IL-1β+miR-128-3p抑制+升麻素苷组中ABCA1 和LXRβ蛋白表达降低,MMP-3 和Bax蛋白表达升高(均P<0.05).结论 升麻素苷可介导lncRNA NEAT1/miR-128-3p改善骨关节炎软骨细胞胆固醇代谢.