摘要目的 探讨含笑内酯通过信号传导和转录激活因子3(STAT3)/核转录因子-κB(NF-κB)信号通路,对骨髓增殖性肿瘤细胞系中细胞因子表达的影响.方法 选取人肿瘤衍生细胞(UKE-1)和人急性巨核细胞白血病细胞(SET-2)作为研究对象,采用CCK-8法筛选含笑内酯的实验浓度,将UKE-1和SET-2分别分为对照组和2.5、5.0、10.0 μmol/L含笑内酯组,各给药组分别加入终浓度为2.5、5.0、10.0 μmol/L含笑内酯溶液1 mL,对照组仅加入等体积的培养基.采用实时荧光PCR法检测各组细胞白细胞介素-1β(IL-1β)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)和趋化因子2(CCL2)mRNA表达抑制率,采用蛋白印迹法检测各组细胞STAT3、磷酸化STAT3(p-STAT3)的蛋白表达水平.以UKE-1为研究对象,进行还原性谷胱甘肽和双硫苏糖醇的逆转实验,将UKE-1 分为对照组、含笑内酯组、含笑内酯+还原性谷胱甘肽组、含笑内酯+双硫苏糖醇组、还原性谷胱甘肽和双硫苏糖醇组,采用蛋白印迹法检测各组细胞STAT3、p-STAT3 的蛋白表达水平.采用TNF-α(5 μg/L)刺激UKE-1,以复制细胞因子过度分泌的病理模型,将UKE-1分为对照组、模型组及2.5、5.0、10.0 μmol/L含笑内酯组,采用实时荧光PCR法检测上述指标,酶联免疫吸附测定(ELISA)法检测各组细胞培养基中CCL2 含量,蛋白质印迹法检测STAT3、p-STAT3 及NF-κB信号通路相关蛋白的蛋白表达水平.结果 实时荧光PCR法结果显示,与对照组比较,2.5、5.0、10.0 和20.0 μmol/L含笑内酯组UKE-1 在24、48、72 h的增殖抑制率均升高,5.0、10.0 和20.0 μmol/L含笑内酯组SET-2 在48、72 h的增殖抑制率均升高(均P<0.05),为排除高浓度含笑内酯可能导致细胞数量减少对后续结果的影响,后续研究选用 2.5、5.0 和10.0 μmol/L.与对照组比较,2.5、5.0 和 10.0 μmol/L 含笑内酯组 UKE-1 及 SET-2 的 TNF-α mRNA表达抑制率均升高,5.0、10.0 μmol/L含笑内酯组UKE-1 及SET-2 的IL-1β mRNA表达抑制率亦升高,10.0 μmol/L 含笑内酯组 UKE-1 及 SET-2 中 CCL2 mRNA 表达抑制率升高(均 P<0.05).使用TNF-α刺激后,与模型组比较,2.5、5.0、10.0 μmol/L含笑内酯组UKE-1 中TNF-α、IL-1β、CCL2 mRNA表达抑制率均升高(均P<0.05).ELISA法结果显示,与对照组比较,模型组UKE-1中CCL2含量升高;与模型组比较,2.5、5.0、10.0 μmol/L含笑内酯组UKE-1中CCL2含量降低(均P<0.05).蛋白质印迹法结果显示,与对照组比较,5.0、10.0 μmol/L含笑内酯组UKE-1 和SET-2 中p-STAT3蛋白表达水平下调,SET-2中STAT3蛋白表达水平下调(均P<0.05);还原性谷胱甘肽和双硫苏糖醇逆转实验中,与对照组比较,含笑内酯组UKE-1中p-STAT3表达水平降低,与含笑内酯组比较,含笑内酯+双硫苏糖醇组和含笑内酯+还原型谷胱甘肽组UKE-1中p-STAT3蛋白表达水平升高(均P<0.05);使用TNF-α刺激后,与对照组比较,模型组p-STAT3、磷酸化核转录因子-κB激酶亚基α/β(p-IκKα/β)、磷酸化IκBα(p-IκBα)、磷酸化NF-κB p65(p-NF-κB p65)蛋白表达升高,IκBα蛋白表达降低,与模型组比较,2.5、5.0、10.0 μmol/L 含笑内酯组p-IκKα/β、p-IκBα、p-STAT3、p-NF-κB p65 蛋白表达降低,5.0、10.0 μmol/L含笑内酯组IκBα蛋白表达升高(均P<0.05).结论 含笑内酯能够抑制UKE-1和SET-2中IL-1β、TNF-α和CCL2 mRNA表达,以及UKE-1 细胞对CCL2 的分泌,这种抑制作用可能与其抑制STAT3的磷酸化激活及NF-κB信号通路的激活相关.