摘要目的 通过研究耳穴疗法对失眠模型大鼠睡眠的改善情况及对γ-氨基丁酸(GABA)能系统通路的影响,探讨其中枢作用机制.方法 将 60 只雄性SD大鼠按随机数字表法分为空白对照组、模型组、耳穴贴压组、耳穴刺络组和耳穴刺络结合贴压组,每组12 只.除空白对照组外,其余大鼠采用腹腔注射对氯苯丙氨酸的方法复制失眠模型.造模完成后,分别以耳甲区贴压(耳穴贴压组)、耳尖及耳背刺络(耳穴刺络组)、联合刺激(耳穴刺络结合贴压组)连续干预5 d,每日一次.干预结束后,观察大鼠一般情况及体质量变化;翻正反射实验检测大鼠睡眠潜伏期和睡眠持续时间;HE染色法观察大鼠下丘脑神经元形态;酶联免疫吸附测定法检测大鼠血清GABA、谷氨酸含量;免疫组织化学法(IHC)、实时荧光定量PCR法分别检测大鼠下丘脑γ-氨基丁酸A型受体α1(GABA ARα1)和γ-氨基丁酸A型受体γ2(GABA ARγ2)蛋白表达、mRNA表达;蛋白质印迹法(WB)检测大鼠下丘脑GABA ARα1、GABA ARγ2、谷氨酸脱羧酶65/67(GAD65/67)、γ-氨基丁酸 1 型转运体(GAT-1)和γ-氨基丁酸转氨酶(GABA-T)蛋白表达.结果 与空白对照组比较,模型组大鼠体质量降低,睡眠持续时间缩短(P<0.05),下丘脑神经元形态结构损伤严重,细胞排列紊乱、间隙变大,胞体增大,空泡样性状明显;与模型组比较,各干预组大鼠体质量增加,睡眠持续时间延长(P<0.05),其中耳穴贴压组睡眠持续时间延长更明显(P<0.05),各干预组下丘脑神经元细胞结构损伤均有恢复,耳穴贴压组改善情况尤为明显.与空白对照组比较,模型组大鼠血清GABA含量下降,血清谷氨酸含量升高,下丘脑 GABA ARα1、GABA ARγ2、GAD65/67 蛋白表达降低,GAT-1、GABA-T蛋白表达升高,GABA ARα1、GABA ARγ2 的mRNA表达降低(P<0.05);与模型组比较,耳穴贴压组、耳穴刺络组血清GABA含量升高,耳穴贴压组、耳穴刺络结合贴压组血清谷氨酸含量降低,各干预组下丘脑中GABA ARα1 的mRNA表达升高,耳穴贴压组、耳穴刺络结合贴压组下丘脑中GABA ARγ2 的mRNA 表达升高,耳穴贴压组下丘脑中GABA ARα1(IHC,WB)、GABA ARγ2(WB)、GAD65/67 蛋白表达升高,GAT-1、GABA-T 蛋白表达降低,耳穴刺络组下丘脑中 GABA ARα1、GABA ARγ2 蛋白表达(IHC,WB)升高,GABA-T蛋白表达降低,耳穴刺络结合贴压组下丘脑中GABA ARγ1(IHC)、GABA ARγ2(WB)蛋白表达升高,GAT-1、GABA-T蛋白表达降低(P<0.05);各干预组间比较,耳穴贴压组血清GABA含量升高,血清谷氨酸含量降低,下丘脑GABA ARα1、GABA ARγ2 的mRNA表达升高,GABA ARα1(IHC)、GAD65/67 蛋白表达升高,GABA-T蛋白表达降低(P<0.05),耳穴刺络组下丘脑GABA ARγ2 蛋白表达(IHC)升高(P<0.05).结论 耳穴疗法尤其是耳穴贴压可改善失眠,其作用机制可能是通过上调下丘脑 GABA ARα1、GABA ARγ2、GAD65/67 蛋白表达,下调GAT-1、GABA-T蛋白表达,影响了GABA能系统通路实现的.