摘要目的 观察督脉推法对丙戊酸(VPA)诱导的孤独症谱系障碍(ASD)大鼠行为学的影响,并采用前额叶转录组学测序(RNA-Seq)技术研究督脉推法对 ASD 大鼠发生作用的潜在机制.方法 将9 只受孕12.5 d的SD大鼠,按照随机数字表法选取 6 只腹腔注射 600 mg/kg VPA进行造模,其余3 只注射等体积的生理盐水.孕鼠生产后,对第 21 天的子代雄鼠进行三箱社交实验和旷场实验评价模型.将造模成功的VPA子代雄鼠按照随机数字表法分为模型组和推拿组,每组5 只;按照随机数字表法选取注射生理盐水孕鼠的子代雄鼠 5 只作为空白组.空白组与模型组不做干预,运用团队自主研发的推法刺激装置对推拿组大鼠进行督脉推法刺激,2 次/d,连续 14 d,共计28 次.干预结束后,三箱社交实验测定ASD大鼠社交指数(SI)和社交偏好指数(SPI),旷场实验测定大鼠的总路程和中心区域停留时间,埋珠实验检测大鼠刻板行为,尼氏染色检测大鼠前额叶皮层尼氏体的活性.利用RNA-Seq技术检测大鼠前额叶皮层的差异表达基因(DEGs),进行基因本体(GO)及京都基因与基因组百科全书(KEGG)富集分析,实时荧光定量PCR(RT-qPCR)检测DEGs,蛋白质印迹法(Western blotting)检测高富集信号通路中的相关蛋白.结果 干预前,与空白组比较,推拿组与模型组大鼠SI、SPI均明显降低,总路程和中心区域时间减少(P<0.05).干预后,与空白组比较,模型组ASD大鼠SI、SPI活跃度降低,总路程和中心区域时间减少,埋珠数量增多,前额叶尼氏体数量减少(P<0.05);与模型组比较,推拿组大鼠SI、SPI活跃度升高,总路程和中心区域时间增多,埋珠数量减少,前额叶尼氏体数量增多(P<0.05).前额叶RNA-Seq测序结果显示,与模型组比较,督脉推法可调节推拿组ASD大鼠前额叶皮层 213 个DEGs的表达,其中上调181 个基因,下调32 个基因,GO分析主要聚焦在细胞组分中.在KEGG富集分析中,共富集到181 条信号通路,其中67 条信号通路差异具有统计学意义(P<0.05),在磷脂酰肌醇3-激酶(PI3K)/蛋白激酶B(AKT)信号通路中富集最高.实验验证分析结果,RT-qPCR检测显示,与空白组比较,干预后模型组ASD大鼠转化生长因子α(TGF-α)、人表皮生长因子受体3(ErbB3)、血清/糖皮质激素调节激酶2(Sgk2)和I型胶原蛋白α2 链(Col1α2)表达均下降,而肝细胞生长因子(Hgf)表达升高(P<0.01);与模型组比较,推拿组大鼠前额叶TGF-α、ErbB3、Sgk2 和Col1α2 表达升高,而Hgf表达下降(P<0.05),其结果与RNA-seq测序结果一致;Western blotting结果显示,与空白组比较,干预后模型组ASD大鼠大脑前额叶皮层神经调节蛋白 1(NRG1)、ErbB3、神经元型一氧化氮合酶(nNOS)、PI3K、AKT、磷酸化nNOS(p-nNOS)、磷酸化PI3K(p-PI3K)和磷酸化AKT(p-AKT)的表达降低(P<0.05);与模型组比较,推拿组大鼠大脑前额叶皮层 NRG1、ErbB3、nNOS、PI3K、AKT、p-nNOS、p-PI3K和p-AKT的表达升高(P<0.05).结论 督脉推法能够改善ASD模型大鼠社交行为、焦虑行为、刻板行为及神经元的活性,其机制可能与PI3K/AKT信号通路的激活有关.