摘要目的 探讨肝豆灵通过调控长链非编码 RNA 母系表达基因 3(LncRNA Meg3),激活磷脂酰肌醇3-激酶(PI3K)/蛋白激酶 B(Akt)/哺乳动物雷帕霉素靶蛋白(mTOR)信号通路,调控肝星状细胞自噬,改善肝豆状核变性肝纤维化的作用机制.方法 采用随机数字表法将 24 只 SD 大鼠分为空白对照组(n=6)、肝豆灵组(n=18).肝豆灵组大鼠灌胃肝豆灵混悬液(0.96 g/kg),空白对照组大鼠灌胃等体积生理盐水,1 次/d,连续 7 d,制备含药血清和空白血清.采用五水合硫酸铜(CuSO4·5H2 O)刺激人肝星状细胞系 LX-2 构建铜负荷细胞模型,采用 CCK-8 法筛选 CuSO4·5H2 O最佳造模浓度及干预时间、肝豆灵含药血清最佳体积分数及干预时间.将 LX-2 细胞分为对照组、模型组、肝豆灵组、pc DNA3.1-Meg3 组、pcDNA3.1-NC 组,分别进行相应干预.采用 5-乙炔基-2'-脱氧尿嘧啶核苷(EdU)实验检测细胞增殖情况;采用激光共聚焦显微镜观察细胞自噬流变化;采用透射电子显微镜观察细胞超微结构;采用蛋白质印迹法检测自噬关键分子酵母 Atg6 同系物(Beclin-1)、微管相关蛋白1 轻链3(LC3)-Ⅱ/LC3-Ⅰ、泛素结合蛋白 p62(p62),肝星状细胞活化标志物Ⅰ型胶原蛋白(Collagen Ⅰ)、α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA),以及 PI3K/Akt/mTOR 通路磷酸化蛋白(p-PI3K、p-Akt、p-mTOR)与总蛋白的相对表达;实时荧光定量 PCR 法检测 Collagen Ⅰ、α-SMA、LncRNA Meg3、PI3K、Akt、mTOR 的mRNA 表达.结果 100 μmol/L CuSO4·5H2 O 作用48 h 为铜负荷 LX-2 细胞最佳造模条件,10%肝豆灵含药血清作用48 h 为最佳干预条件.与模型组比较,肝豆灵组、pcDNA3.1-Meg3 组绿色荧光点减少,相对荧光强度均降低(P<0.05);激光共聚焦显微镜可见自噬溶酶体数量减少(P<0.05);透射电子显微镜见自噬体和自噬溶酶体数量减少;Beclin-1 蛋白表达、LC3-Ⅱ/LC3-Ⅰ下调(均 P<0.05),p62 蛋白表达升高(P<0.05),Collagen Ⅰ、α-SMA 的蛋白及 mRNA 表达均降低(P<0.05),PI3K/Akt/mTOR 通路 mRNA 表达及 p-PI3K/PI3K、p-Akt/Akt、p-mTOR/mTOR 上调(均 P<0.05).此外,与模型组比较,肝豆灵组 LncRNA Meg3 的 mRNA 表达升高(P<0.05).结论 肝豆灵可通过上调 LncRNA Meg3 表达,激活 PI3K/Akt/mTOR 信号通路,抑制铜负荷 LX-2 细胞的异常自噬,从而延缓肝豆状核变性肝纤维化进程;LncRNA Meg3 可能是肝豆灵改善肝豆状核变性肝纤维化的潜在关键靶点.